NDM-1的纯化、表征以及在细菌活细胞体内活性的实时检测及其抑制研究

发布时间：2017-04-18 19:22

  本文关键词：NDM-1的纯化、表征以及在细菌活细胞体内活性的实时检测及其抑制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：细菌耐药日益严重,而细菌耐药靶蛋白金属β-内酰胺酶是人们目前关注的焦点。近年,金属β-内酰胺酶NDM-1已导致临床医学危机,因为NDM-1能水解几乎所有的抗生素。更严重的是,携带NDM-1基因的质粒能够在不同的细菌中穿梭,而使得耐药细菌迅速地扩散传播。如何应对细菌耐药,人们需要深入研究金属β-内酰胺酶,使用新的手段检测金属β-内酰胺酶,合成和发展酶的抑制剂。基于这一理念,本文进行了如下的研究工作：1.在普通大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化了“超级细菌”耐药靶蛋白NDM-1；纯化所得蛋白经聚丙烯凝胶电泳确认并进行了紫外表征；在制备apo-NDM-1的基础上,重组Co(Ⅱ)-NDM-1并对其进行光谱表征。酶动力学评价NDM·1水解三类β-内酰胺类抗生素之代表,包括先锋V、亚胺培南及氨苄青霉素。对实验室合成的八种化合物进行了酶抑制动力学筛选。2.设计发展了一种紫外-可见光谱的监测方法,用于实时监测细菌活细菌体内金属β-内酰胺酶的活性。研究了细菌活细胞体内NDM-1的活性,实时监测了EDTA,D-脯氨酸以及实验室合成的一种抑制剂对产NDM-1细菌的抑制作用。3.设计并合成了两个金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物,对其进行了光谱表征。
【关键词】：细菌耐药 金属β-内酰胺酶NDM-1 细菌活体细胞检测 荧光底物
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 第一章 绪论9-29
• 1.1 抗生素及细菌耐药9-12
• 1.2 β-内酰胺酶介绍12-13
• 1.3 金属β-内酰胺酶13-20
• 1.3.1 金属β-内酰胺酶的分类14-18
• 1.3.2 金属β-内酰胺酶的检测18-19
• 1.3.3 金属β-内酰胺酶抑制剂19-20
• 1.4 选题意义及研究内容20-22
• 参考文献22-29
• 第二章 金属β-内酰胺酶NDM-1的表达纯化及其表征29-46
• 2.1 研究背景29-30
• 2.2 实验所用材料及仪器设备30-34
• 2.2.1 实验材料及试剂30-31
• 2.2.2 所用仪器设备31-32
• 2.2.3 所用溶液及其配制方法32-34
• 2.3 实验部分34-39
• 2.3.1 含NDM-1基因的质粒转化34-35
• 2.3.2 金属β-内酰胺酶NDM-1的表达35-36
• 2.3.3 金属β-内酰胺酶NDM-1的纯化36
• 2.3.4 金属β-内酰胺酶NDM-1的表征36-39
• 2.4 结果与讨论39-44
• 2.4.1 纯化蛋白的凝胶电泳39-40
• 2.4.2 NDM-1紫外光谱及荧光光谱40-41
• 2.4.3 NDM-1水解各类抗生素41-43
• 2.4.4 NDM-1抑制动力学及抑制剂筛选43-44
• 2.5 本章小结44-45
• 参考文献45-46
• 第三章 金属β-内酰胺酶NDM-1在细菌活细胞体内活性的实时监测与抑制研究46-62
• 3.1 研究背景46-47
• 3.2 实验所用材料及仪器设备47-48
• 3.2.1 实验所用材料47-48
• 3.2.2 实验所用仪器设备48
• 3.3 实验部分48-51
• 3.3.1 实验用活体细菌准备48-49
• 3.3.2 产NDM-1细菌水解抗生素的紫外监测方法49
• 3.3.3 产NDM-1细菌抑制的紫外实时监测研究49-51
• 3.3.4 先锋V在不同细菌环境中的紫外水解表现51
• 3.4 结果与讨论51-59
• 3.4.1 产NDM-1大肠杆菌水解抗生素的实验结果与讨论51-52
• 3.4.2 产NDM-1大肠杆菌水解先锋V的对比实验52-55
• 3.4.3 产NDM-1大肠杆菌水解先锋V被抑制的实验结果与讨论55-58
• 3.4.4 产NDM-1大肠杆菌之活力检测的实验结果58
• 3.4.5 先锋V在不同细菌环境中水解的紫外表现与讨论58-59
• 3.5 本章小结59-61
• 参考文献61-62
• 第四章 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的合成62-70
• 4.1 研究背景62-63
• 4.1.1 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的简述62
• 4.1.2 实验设计思路62-63
• 4.2 实验所用仪器及试剂63-64
• 4.3 实验部分64-67
• 4.3.1 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的合成64-67
• 4.3.2 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的光谱检测67
• 4.4 结果与讨论67-68
• 4.4.1 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的合成67
• 4.4.2 金属β-内酰胺酶之头孢类荧光底物的光谱检测67-68
• 4.5 本章小结68-69
• 参考文献69-70
• 全文总结70-72
• 附录72-76
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果76-77
• 致谢77

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘军锋;贾克刚;刘运德;;细菌耐药机制的研究进展[J];国际检验医学杂志;2006年11期

2 徐冬梅;;细菌耐药性研究[J];河北化工;2009年06期

3 党京丹;;细菌耐药机制研究新进展[J];临床和实验医学杂志;2009年09期

  本文关键词：NDM-1的纯化、表征以及在细菌活细胞体内活性的实时检测及其抑制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：315593