病毒疫苗的衣壳蛋白抗原在E.coli中的表达策略及免疫活性研究

发布时间：2021-06-08 22:06

　　为了探索以衣壳蛋白为核心的病毒类疫苗靶向抗原在大肠杆菌中的表达策略,我们以猪圆环病毒3型（PCV3）作为研究对象,用大肠杆菌表达系统表达了全长型PCV3衣壳蛋白（L蛋白）、N端截短型PCV3衣壳蛋白（NOR蛋白）、N端替换型PCV3衣壳蛋白（DL蛋白）以及逃逸表位替换型PCV3衣壳蛋白（DLCS蛋白）4种重组蛋白,观察了4种重组蛋白的表达量及可溶性,并探究了DL蛋白和DLCS蛋白的免疫活性。本文的研究为病毒的衣壳蛋白在大肠杆菌系统中的高效可溶性表达提供了一定的思路。 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

酶切位点设计图

图 2.2 重叠延伸 PCR 模式图Fig 2.2 The pattern of SOE PCR（2）常规 PCR 引物设计除了特殊的 PCR 反应，本课题中的实验还涉及到常规的 PCR 引物设计。PCR 反应需要两种引物，分别为 5’引物和 3’引物。引物设计的原则包括特异性与灵敏性，即引物能与靶 DNA 特异性地结合，而不与其他非目的 DNA 结合，并且 DNA 聚合酶能对引物进行有效的延伸。具体设计的步骤如下：1）选择扩增的目的基因2）以正义链为设计模板，5’引物与 5’端的序列保持一致，3’引物为 3’端序列互补倒读后的序列。3）用 Oligo 软件进行引物分析，并根据分析结果进行优化。分析要点包括：①引物 3’末端连续与模板严格互补配对的碱基至少为 8 个；②嘌呤、嘧啶随机分布，避免出现碱基堆积现象；③GC 比值一般为 45-55%；④引物 3’端避开密码子

图 2.3 T-Vector pMD（Simple）图谱Fig 2.3 The map of T-Vector pMD（Simple） T 载体的连接条件：16℃放置 30 min-1 h 或 16℃过夜。下：片段与表达载体（pET28a+）相连的限制性内切酶切割含有目的片段的质粒及 pET28a（+）T 载体 0.6 μL目的片段 A 4 μLSolutionⅠ 5 μLddH2O 0.4 μL总体积 10 μL

【参考文献】：
期刊论文
[1]分子伴侣促进截短型人乳头瘤病毒58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达[J]. 冉云伟,张改平,刘运超,陈玉梅,王聚财,孟凤丽,王爱萍.  生物技术通讯. 2017(03)
[2]漆酶N端融合His-tag或S-tag标签促进其在大肠杆菌中可溶性表达[J]. 岳青霞,张丽洁,田健,伍宁丰,姚冬生.  生物技术通报. 2016(03)

硕士论文
[1]大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达的研究[D]. 苏裕.华东师范大学 2007



本文编号：3219296