基于重组酶介导等温扩增技术的细粒棘球绦虫核酸检测方法的建立
发布时间：2021-06-11 15:21
目的建立一种基于重组酶介导等温扩增技术（RAA）的细粒棘球绦虫核酸检测方法。方法针对细粒棘球绦虫12S rRNA基因序列片段,设计、筛选并合成RAA特异性扩增引物和荧光检测探针,构建细粒棘球绦虫荧光RAA检测方法。分别以含靶序列的不同拷贝数重组质粒和不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测灵敏度;分别以细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩虫、华支睾吸虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫、猪带绦虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测特异性。结果成功建立了细粒棘球绦虫荧光RAA检测法,在39℃条件下20 min内可以实现对细粒棘球绦虫基因组DNA特异性扩增,最低可以检测出10拷贝/μL含靶序列的重组质粒DN A和0.1 ng/μL细粒棘球绦虫基因组DN A样本,具备较高敏感性;对多房棘球绦虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩虫、华支睾吸虫、牛带绦虫、曼氏迭宫绦虫、猪带绦虫基因组DNA均无阳性扩增,具备较高特异性;且该荧光RAA法可成功检出细粒棘球绦虫包囊中DNA。结论成功建立了一种快速、灵敏、特异的可用于细粒棘球绦虫核酸检测的荧光R...
【文章来源】：中国血吸虫病防治杂志. 2020,32(04)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
荧光RAA法检测细粒棘球绦虫包囊DNA样本FigFig.2FluorescentRAAassayfordetectionofDNAsamplesfromEE.granulosuscysts
中国血吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4间逐渐延长（K值依次为6732、3837、1075、116）。本次实验最低可检测到含有10拷贝/μL重组质粒的荧光信号（图3）。采用荧光RAA法检测不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA样本。结果显示，除阴性对照外，浓度分别为10、1、0.1ng/μL的细粒棘球绦虫基因组DNA样本均出现阳性扩增（K值分别为7186、1675、296），检测敏感性可达0.1ng/μL基因组DNA（图4）。图3以不同拷贝数重组质粒为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.3SensitivityoffluorescentRAAassayusingvariouscopynumbersofrecombinantplasmidsastemplates图4以不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.4SensitivityoffluorescentRAAassayusingdifferentconcentrationsofEE.granulosusgenomicDNAsamplesastemplates4荧光RAA法检测特异性分别以细粒棘球绦虫包囊、多房棘球绦虫幼虫、日本血吸虫虫卵、曼氏血吸虫虫卵、十二指肠钩蚴培养物、华支睾吸虫囊蚴、牛带绦虫孕节、曼氏迭宫绦虫孕节、猪带绦虫孕节基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增，结果显示，细粒棘球绦虫包囊DNA存在阳性扩增（K值为657），其他样本扩增结果均为阴性（图5）。图5荧光RAA法检测特异性Figig.5SpecificityoffluorescentRAAassay讨论棘球蚴病在我国中西北部地区仍存在较大范围流行，严重威胁着流行区人民群众身体健康和生活水平［13］；同时，随着西部牛羊等大量流入东部地区，也给当地带来了一定的棘球蚴病传播风险［1
吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4间逐渐延长（K值依次为6732、3837、1075、116）。本次实验最低可检测到含有10拷贝/μL重组质粒的荧光信号（图3）。采用荧光RAA法检测不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA样本。结果显示，除阴性对照外，浓度分别为10、1、0.1ng/μL的细粒棘球绦虫基因组DNA样本均出现阳性扩增（K值分别为7186、1675、296），检测敏感性可达0.1ng/μL基因组DNA（图4）。图3以不同拷贝数重组质粒为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.3SensitivityoffluorescentRAAassayusingvariouscopynumbersofrecombinantplasmidsastemplates图4以不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.4SensitivityoffluorescentRAAassayusingdifferentconcentrationsofEE.granulosusgenomicDNAsamplesastemplates4荧光RAA法检测特异性分别以细粒棘球绦虫包囊、多房棘球绦虫幼虫、日本血吸虫虫卵、曼氏血吸虫虫卵、十二指肠钩蚴培养物、华支睾吸虫囊蚴、牛带绦虫孕节、曼氏迭宫绦虫孕节、猪带绦虫孕节基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增，结果显示，细粒棘球绦虫包囊DNA存在阳性扩增（K值为657），其他样本扩增结果均为阴性（图5）。图5荧光RAA法检测特异性Figig.5SpecificityoffluorescentRAAassay讨论棘球蚴病在我国中西北部地区仍存在较大范围流行，严重威胁着流行区人民群众身体健康和生活水平［13］；同时，随着西部牛羊等大量流入东部地区，也给当地带来了一定的棘球蚴病传播风险［14］
【参考文献】：
期刊论文
[1]2011-2018年宜兴市棘球蚴病监测[J]. 梁静,薛志强,李学兵,孙旭峰. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(06)
[2]重组酶介导的华支睾吸虫特异性核酸等温扩增方法的建立及初步评价[J]. 张强,丁昕,吴小珉,刘燕红,刘剑峰,徐祥珍,应清界,曹俊,戴洋. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(05)
[3]重组酶介导的隐孢子虫属特异性等温核酸扩增方法的建立及评价[J]. 倪碧娴,吴小珉,刘燕红,徐祥珍,应清界,曹俊,戴洋. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(04)
[4]重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测日本血吸虫感染性钉螺[J]. 李婷,刘燕红,赵松,熊春蓉,董萱,张键锋,李伟,应清界,杨坤. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(02)
[5]等温扩增技术在寄生虫及其他病原体检测中的应用[J]. 李婷,杨坤. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(02)
[6]牛羊包虫病实验室诊断技术的研究进展[J]. 孙雨,王晓英,董浩,曲萍,胡冬梅,赵柏林,石慧,宋晓晖. 中国草食动物科学. 2016(01)
[7]我国主要动物源性寄生虫病检测技术研究进展[J]. 盖文燕,王君玮,王娟,曲志娜,黄秀梅,李玉清,洪军. 中国动物检疫. 2013(12)
[8]包虫病诊断技术与预防疫苗的研究进展[J]. 赵莉,张旭,张壮志,马正海,古努尔·吐尔逊,张文宝,石保新. 疾病预防控制通报. 2013(02)
[9]环介导等温扩增技术检测细粒棘球绦虫DNA的初步研究[J]. 徐祥珍,金小林,李健,江文才,蒋岗. 中国血吸虫病防治杂志. 2011(05)
本文编号：3224784
【文章来源】：中国血吸虫病防治杂志. 2020,32(04)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
荧光RAA法检测细粒棘球绦虫包囊DNA样本FigFig.2FluorescentRAAassayfordetectionofDNAsamplesfromEE.granulosuscysts
中国血吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4间逐渐延长（K值依次为6732、3837、1075、116）。本次实验最低可检测到含有10拷贝/μL重组质粒的荧光信号（图3）。采用荧光RAA法检测不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA样本。结果显示，除阴性对照外，浓度分别为10、1、0.1ng/μL的细粒棘球绦虫基因组DNA样本均出现阳性扩增（K值分别为7186、1675、296），检测敏感性可达0.1ng/μL基因组DNA（图4）。图3以不同拷贝数重组质粒为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.3SensitivityoffluorescentRAAassayusingvariouscopynumbersofrecombinantplasmidsastemplates图4以不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.4SensitivityoffluorescentRAAassayusingdifferentconcentrationsofEE.granulosusgenomicDNAsamplesastemplates4荧光RAA法检测特异性分别以细粒棘球绦虫包囊、多房棘球绦虫幼虫、日本血吸虫虫卵、曼氏血吸虫虫卵、十二指肠钩蚴培养物、华支睾吸虫囊蚴、牛带绦虫孕节、曼氏迭宫绦虫孕节、猪带绦虫孕节基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增，结果显示，细粒棘球绦虫包囊DNA存在阳性扩增（K值为657），其他样本扩增结果均为阴性（图5）。图5荧光RAA法检测特异性Figig.5SpecificityoffluorescentRAAassay讨论棘球蚴病在我国中西北部地区仍存在较大范围流行，严重威胁着流行区人民群众身体健康和生活水平［13］；同时，随着西部牛羊等大量流入东部地区，也给当地带来了一定的棘球蚴病传播风险［1
吸虫病防治杂志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4间逐渐延长（K值依次为6732、3837、1075、116）。本次实验最低可检测到含有10拷贝/μL重组质粒的荧光信号（图3）。采用荧光RAA法检测不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA样本。结果显示，除阴性对照外，浓度分别为10、1、0.1ng/μL的细粒棘球绦虫基因组DNA样本均出现阳性扩增（K值分别为7186、1675、296），检测敏感性可达0.1ng/μL基因组DNA（图4）。图3以不同拷贝数重组质粒为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.3SensitivityoffluorescentRAAassayusingvariouscopynumbersofrecombinantplasmidsastemplates图4以不同浓度细粒棘球绦虫基因组DNA为模板的荧光RAA法检测敏感性FigFig.4SensitivityoffluorescentRAAassayusingdifferentconcentrationsofEE.granulosusgenomicDNAsamplesastemplates4荧光RAA法检测特异性分别以细粒棘球绦虫包囊、多房棘球绦虫幼虫、日本血吸虫虫卵、曼氏血吸虫虫卵、十二指肠钩蚴培养物、华支睾吸虫囊蚴、牛带绦虫孕节、曼氏迭宫绦虫孕节、猪带绦虫孕节基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增，结果显示，细粒棘球绦虫包囊DNA存在阳性扩增（K值为657），其他样本扩增结果均为阴性（图5）。图5荧光RAA法检测特异性Figig.5SpecificityoffluorescentRAAassay讨论棘球蚴病在我国中西北部地区仍存在较大范围流行，严重威胁着流行区人民群众身体健康和生活水平［13］；同时，随着西部牛羊等大量流入东部地区，也给当地带来了一定的棘球蚴病传播风险［14］
【参考文献】：
期刊论文
[1]2011-2018年宜兴市棘球蚴病监测[J]. 梁静,薛志强,李学兵,孙旭峰. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(06)
[2]重组酶介导的华支睾吸虫特异性核酸等温扩增方法的建立及初步评价[J]. 张强,丁昕,吴小珉,刘燕红,刘剑峰,徐祥珍,应清界,曹俊,戴洋. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(05)
[3]重组酶介导的隐孢子虫属特异性等温核酸扩增方法的建立及评价[J]. 倪碧娴,吴小珉,刘燕红,徐祥珍,应清界,曹俊,戴洋. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(04)
[4]重组酶介导的核酸等温扩增荧光法快速检测日本血吸虫感染性钉螺[J]. 李婷,刘燕红,赵松,熊春蓉,董萱,张键锋,李伟,应清界,杨坤. 中国血吸虫病防治杂志. 2019(02)
[5]等温扩增技术在寄生虫及其他病原体检测中的应用[J]. 李婷,杨坤. 中国血吸虫病防治杂志. 2018(02)
[6]牛羊包虫病实验室诊断技术的研究进展[J]. 孙雨,王晓英,董浩,曲萍,胡冬梅,赵柏林,石慧,宋晓晖. 中国草食动物科学. 2016(01)
[7]我国主要动物源性寄生虫病检测技术研究进展[J]. 盖文燕,王君玮,王娟,曲志娜,黄秀梅,李玉清,洪军. 中国动物检疫. 2013(12)
[8]包虫病诊断技术与预防疫苗的研究进展[J]. 赵莉,张旭,张壮志,马正海,古努尔·吐尔逊,张文宝,石保新. 疾病预防控制通报. 2013(02)
[9]环介导等温扩增技术检测细粒棘球绦虫DNA的初步研究[J]. 徐祥珍,金小林,李健,江文才,蒋岗. 中国血吸虫病防治杂志. 2011(05)
本文编号：3224784
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