丘脑底核orexin-B通过OX-2R调控MPTP帕金森病模型小鼠运动行为的研究
发布时间：2021-06-16 00:03
位于大脑半球底部白质中的基底神经节,在机体运动功能调节中发挥重要作用。丘脑底核（subthalamic nucleus,STN）作为基底神经节中唯一的兴奋性核团,是基底神经节的重要信息整合核团,基底神经节任一环路出现异常均会导致帕金森病（Parkinson’s disease）等运动障碍性疾病。下丘脑分泌的一类生物活性肽-食欲素（orexin）,参与运动调控等多种生物学效应。有文献报道orexin能够增加正常大鼠丘脑底核神经元的自发放电并调控躯体摇摆行为。丘脑底核有丰富的orexin-2受体（orexin-2 receptor,OX-2R）表达。目的:探讨丘脑底核orexin-B对1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine（MPTP）帕金森病模型小鼠运动行为的调控,并在单细胞水平研究其可能的机制。方法:采用旷场实验和爬杆实验观察丘脑底核orexin-B对MPTP帕金森病模型小鼠运动行为的影响。进一步利用在体细胞外电生理记录观察orexin-B对丘脑底核神经元自发放电的调控。最后通过免疫组织化学技术观察OX-2R在正常和MPTP帕金森病模型小...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞外记录用三管玻璃微电极Fig.1Schemeof3-barrelglassmicroelectrodeusinginextracellularrecording
图 2 丘脑底核细胞外电生理记录定位冠状切片图Fig. 2 Confirmation of the site of extracellular electrophysiological recordingSTN: subthalamic nucleus.组织化学染色常小鼠与成模两天左右的帕金森病模型小鼠灌注取脑，放置多聚甲醛而后依次经 20%、30%的蔗糖溶液脱水，若脑组织未完全沉淀至溶液新蔗糖溶液中重新脱水。冰冻切片机将脑组织行 20μm 切片，在 24 孔 的 PBS 反复冲洗脑片（5min×3 次）。每孔滴加 3%内源性过氧化物酶室温下孵育 5~10min，之后用 PBS 冲洗 3 次至无泡沫。每孔滴加 1体或 1:250 的 OX-2R 抗体，周围孔滴入适量 PBS 防止水分蒸发，密封夜。24~36h 后用 PBS 反复冲洗 3 次，每孔滴加 200μL 山羊抗兔二抗育 60~90min 后行 DAB 显色（5~10min），贴片→晾干→酒精梯/80%/95%/100%）→二甲苯透明处理→封片。学分析
图 3 双侧丘脑底核微量注射 orexin-B 对正常小鼠旷场运动总距离的影响cts of bilateral-subthalamic-injection of orexin-B on total distance travelfield test of normal miceshowing that the total distance traveled in orexin-B mice was significaith normal saline mice.**P<0.01 compared with normal saline grouns: not significant.鼠运动协调的改变验中，取 23 只小鼠进行运动协调能力的测试，生理盐水组 5 只CS-OX2-29 组 6 只和联合给药 Orexin-B+TCS-OX2-29 组 6 只示，生理盐水组小鼠转头时间为（1.14±0.13）s，Orexin-B 组7±0.16）s，两组比较差异显著（t=2.40，P=0.050）。TCS-OX为（1.05±0.09）s，与生理盐水组相比，无显著性差异（TCS-OX2-29 组小鼠转头时间为（1.23±0.10）s，与 Orexin-B （P=0.105）。生理盐水组小鼠爬杆时间为（2.54±0.20）s，
本文编号：3231963
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：59 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞外记录用三管玻璃微电极Fig.1Schemeof3-barrelglassmicroelectrodeusinginextracellularrecording
图 2 丘脑底核细胞外电生理记录定位冠状切片图Fig. 2 Confirmation of the site of extracellular electrophysiological recordingSTN: subthalamic nucleus.组织化学染色常小鼠与成模两天左右的帕金森病模型小鼠灌注取脑，放置多聚甲醛而后依次经 20%、30%的蔗糖溶液脱水，若脑组织未完全沉淀至溶液新蔗糖溶液中重新脱水。冰冻切片机将脑组织行 20μm 切片，在 24 孔 的 PBS 反复冲洗脑片（5min×3 次）。每孔滴加 3%内源性过氧化物酶室温下孵育 5~10min，之后用 PBS 冲洗 3 次至无泡沫。每孔滴加 1体或 1:250 的 OX-2R 抗体，周围孔滴入适量 PBS 防止水分蒸发，密封夜。24~36h 后用 PBS 反复冲洗 3 次，每孔滴加 200μL 山羊抗兔二抗育 60~90min 后行 DAB 显色（5~10min），贴片→晾干→酒精梯/80%/95%/100%）→二甲苯透明处理→封片。学分析
图 3 双侧丘脑底核微量注射 orexin-B 对正常小鼠旷场运动总距离的影响cts of bilateral-subthalamic-injection of orexin-B on total distance travelfield test of normal miceshowing that the total distance traveled in orexin-B mice was significaith normal saline mice.**P<0.01 compared with normal saline grouns: not significant.鼠运动协调的改变验中，取 23 只小鼠进行运动协调能力的测试，生理盐水组 5 只CS-OX2-29 组 6 只和联合给药 Orexin-B+TCS-OX2-29 组 6 只示，生理盐水组小鼠转头时间为（1.14±0.13）s，Orexin-B 组7±0.16）s，两组比较差异显著（t=2.40，P=0.050）。TCS-OX为（1.05±0.09）s，与生理盐水组相比，无显著性差异（TCS-OX2-29 组小鼠转头时间为（1.23±0.10）s，与 Orexin-B （P=0.105）。生理盐水组小鼠爬杆时间为（2.54±0.20）s，
本文编号：3231963
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