登革病毒2型型特异性抗原片段的鉴定及其抗体ELISA检测方法的建立

发布时间：2021-06-18 18:32

　　目的筛选、鉴定登革病毒（Dengue virus,DENV）2型（DV2）型特异性抗原片段;建立优化检测DV2抗体的ELISA方法,并进行临床应用验证。方法采用生物信息学方法分析1～4型（DV1～DV4）及其相近虫媒病毒基因组序列,选择预测得分较高且在不同DV2流行株中高度保守的表位;利用pMal-c2x表达系统制备其原核表达抗原,Western blot法分析其免疫原性;建立优化检测DV2抗体的ELISA方法,并验证方法的特异性及灵敏性;应用优化的方法检测33份各型登革热（Dengue fever,DF）确诊患者及30份健康体检人群血清样本。结果经生物信息学分析,预测获得DV2特异性抗原表位12段,预测得分值较高的8段（E123～128、E131～135、E143～149、E223～229、E286～294、E340～347、E383～387及E391～398）重组表达载体经双向测序证实读码框架准确,经Western blot分析,包含抗原位点E143～149区域的融合表达片段D2Ag3仅与DV2多克隆抗体发生免疫反应。ELISA优化条件为抗原包被浓度2μg/mL,4℃包被24 h,... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(05)CSCD

【文章页数】：6 页

【图文】：

重组原核表达抗原的Western blot分析

ELISA反应包被条件优化结果

结果显示，抗原包被浓度在0.25～2μg/mL时，A450呈上升趋势，2μg/mL抗原的A450达到峰值，在2～4μg/mL浓度范围内保持相对稳定，随后随着包被浓度增加，A450稍有下降，见图3。确定最适包被浓度为2μg/mL。2.4.3 封闭时间

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国登革热现状[J]. 张复春.  新发传染病电子杂志. 2018(02)
[2]广东省流行的3株登革热2型病毒基因组全序列测定及分析[J]. 白志军,张培,洪文艳,刘建伟,狄飚,杨智聪,任瑞文,方美玉,林立辉.  中国媒介生物学及控制杂志. 2013(05)
[3]海南岛两株甲病毒基因组3′末端核苷酸序列的克隆与分析[J]. 赵文忠,周国林,何海怀,付士红,金奇,赵春生,方美玉,蒋廉华,林立辉,梁国栋,侯云德.  中华实验和临床病毒学杂志. 2000(03)



本文编号：3237172