利用CRISPR/Cas9系统快速建立APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型

发布时间：2021-06-21 16:08

　　目的利用CRISPR/Cas9系统构建APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病（AD）小鼠模型,为开展AD的病因治疗提供载体。方法采用CRISPR/Cas9系统,选择H11作为插入位点,将有活性的sgRNA、Cas9 RNA和含有目标同源重组序列的载体显微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中,鉴定得到的F0代阳性小鼠再与C57BL/6野生小鼠交配,从而获得F1代小鼠。对鉴定得到的F1代杂合子小鼠,选择来自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代杂合子小鼠,达到性成熟后进行同胞交配,获得F2代小鼠。采用PCR方法鉴定F2代小鼠的基因型结果,采用Western blot检测APP和PS1在F2代小鼠脑组织中的蛋白表达水平。结果 27只F2代小鼠经PCR鉴定基因型,5只F2代小鼠出现约344 bp和608 bp的目的基因条带,表明成功构建出转入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠。Western blot检测显示APPswe/PS1dE9双转基因AD小鼠的APP和PS1的表达水平均明显高于同窝野生型小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统可成功构建APPs... 

【文章来源】：浙江医学. 2020,42(15)

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

小鼠H11位点及含有APPswe和PS1d E9同源重组序列的载体构建图

sg RNA体外相对活性

sg RNA评分及脱靶分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]高效切割Hipp11敲入位点的sgRNA设计及活性验证[J]. 吴曦,周舒雅,刘甦苏,谷文达,左琴,李保文,贺争鸣,范昌发.  实验动物科学. 2015(05)



本文编号：3240979