以MDCK为基质的H5N1流感全病毒灭活疫苗的制备及其免疫学评价
发布时间：2021-06-24 17:48
目的利用生物反应器培养技术大规模制备以MDCK细胞为基质的H5N1流感全病毒灭活疫苗,并进行免疫学评价。方法利用7. 5 L生物反应器,以5 g/L微载体培养MDCK-G1细胞,当细胞密度达到1. 5×106或2. 5×106个/mL时,以0. 001、0. 000 1、0. 000 01 MOI接种H5N1流感病毒,每12 h取样检测流感病毒血凝滴度,并观察细胞形态;利用40 L生物反应器进行放大培养,收获病毒液后进行纯化。以不同剂量的细胞基质和鸡胚基质流感疫苗免疫BALB/c小鼠及攻毒,检测免疫原性。结果当细胞密度达1. 5×106个/mL时,以0. 000 1 MOI接种H5N1流感病毒48 h后,流感病毒滴度可达1∶1 024。纯化后病毒液杂蛋白去除率为91. 2%,回收率为87. 9%,总蛋白与HA比值低于4. 5,符合《中国药典》三部（2015版）相关规定。各剂量组细胞基质疫苗血凝抑制试验中和抗体滴度略高于鸡胚基质疫苗,其中10μg剂量组差异无统计学意义（P> 0. 05）,0. 1μg剂量组差异有统计...
【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(01)CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
7.5 L生物反应器中接种病毒时不同细胞浓度下病毒血凝滴度
结果显示，攻毒后PBS组小鼠体重迅速下降，攻毒后第8天全部死亡；其余各实验组小鼠体重均先下降后上升，攻毒后14 d，各组存活小鼠体重均恢复至攻毒前。见图5。在攻毒后第3天开始出现小鼠死亡现象，至攻毒后第14天观察期末，细胞基质疫苗与鸡胚基质疫苗10μg剂量组均无小鼠死亡，保护率100%;1和0.1μg剂量组细胞基质疫苗的保护率分别为80%和40%，均高于鸡胚基质疫苗（70%和30%），但差异均无统计学意义（χ2=1.08～1.16,P>0.05）。见图6。表明细胞基质疫苗对H5N1攻击毒株的保护率非劣效于鸡胚基质疫苗，MDCK细胞可作为生产H5N1流感疫苗的基质。图6 攻毒试验小鼠死亡监测
结果显示，初免后小鼠中和抗体滴度偏低，加强免疫后明显升高，第28天达到峰值。其中10μg剂量组细胞基质疫苗中和抗体滴度达到最高（1∶414），高于鸡胚基质疫苗（1∶383），差异无统计学意义（t=1.45,P>0.05);0.1μg剂量组细胞基质疫苗中和抗体滴度为1∶74，高于鸡胚基质疫苗（1∶43），差异有统计学意义（t=3.98,P<0.05）。第35天后，所有剂量组中和抗滴度下降，第49天降至1∶40及以下。见图4。表明细胞和鸡胚基质疫苗均可以产生较好的免疫效果，且细胞基质疫苗免疫原性非劣效于鸡胚基质疫苗。2.6 攻毒试验
本文编号：3247558
【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2020,33(01)CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
7.5 L生物反应器中接种病毒时不同细胞浓度下病毒血凝滴度
结果显示，攻毒后PBS组小鼠体重迅速下降，攻毒后第8天全部死亡；其余各实验组小鼠体重均先下降后上升，攻毒后14 d，各组存活小鼠体重均恢复至攻毒前。见图5。在攻毒后第3天开始出现小鼠死亡现象，至攻毒后第14天观察期末，细胞基质疫苗与鸡胚基质疫苗10μg剂量组均无小鼠死亡，保护率100%;1和0.1μg剂量组细胞基质疫苗的保护率分别为80%和40%，均高于鸡胚基质疫苗（70%和30%），但差异均无统计学意义（χ2=1.08～1.16,P>0.05）。见图6。表明细胞基质疫苗对H5N1攻击毒株的保护率非劣效于鸡胚基质疫苗，MDCK细胞可作为生产H5N1流感疫苗的基质。图6 攻毒试验小鼠死亡监测
结果显示，初免后小鼠中和抗体滴度偏低，加强免疫后明显升高，第28天达到峰值。其中10μg剂量组细胞基质疫苗中和抗体滴度达到最高（1∶414），高于鸡胚基质疫苗（1∶383），差异无统计学意义（t=1.45,P>0.05);0.1μg剂量组细胞基质疫苗中和抗体滴度为1∶74，高于鸡胚基质疫苗（1∶43），差异有统计学意义（t=3.98,P<0.05）。第35天后，所有剂量组中和抗滴度下降，第49天降至1∶40及以下。见图4。表明细胞和鸡胚基质疫苗均可以产生较好的免疫效果，且细胞基质疫苗免疫原性非劣效于鸡胚基质疫苗。2.6 攻毒试验
本文编号：3247558
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