长期传代培养人脐带间充质干细胞免疫调节功能的比较
发布时间：2021-06-26 08:25
该研究针对不同代次人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）进行系统性比较,探索长期传代培养对其免疫调节功能的影响及可能的机制。hUC-MSCs反复传代培养至P5、P10、P15代,对其分化潜能和表面标志物进行鉴定,β-半乳糖苷酶染色及流式细胞术检测其衰老与凋亡状况。通过不同条件下与人外周血淋巴细胞共培养,比较不同代次hUC-MSCs对淋巴细胞的增殖活性、细胞周期变化及T细胞亚群的调节作用;ELISA检测共培养体系中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量。Western blot检测不同代次hUC-MSCs中PD-L1、IDO的表达。结果表明,传代培养至P15代,其干细胞生物学特性无明显改变,但β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数显著升高。三个代次hUC-MSCs均能调控活化后的淋巴细胞周期,并有效抑制其增殖及Th1/Th17细胞亚群,影响炎症因子的表达,且三个代次间无显著性差异。相对而言,P15代细胞表现出对Treg亚群及IL-1β的调节能力下降。长期传代培养后的hUC-MSCs仍能保持其多向分化潜...
【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2020,42(04)CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
不同代次hUC-MSCs细胞衰老与凋亡检测
2.5 hUC-MSCs抑制PBMCs炎症因子的分泌表1 T淋巴细胞在hUC-MSCs作用下细胞周期的比例Table 1 Proportion of cell cycle in T lymphocytes treated with hUC-MSCs 组别Group S期/%S period /% G1期/%G1 period /% G2期/%G2 period /% PBMCs 1.25 ±0.78 97.24±1.35 1.51±0.62 PBMCs+PHA 31.39 ±1.44 64.10±0.72 4.51±0.72 +P5 hUC-MSCs 2.16 ±1.89 96.24±0.78 1.61±1.12 +P10 hUC-MSCs 2.76 ±0.45 96.32±0.11 1.06±0.13 +P15 hUC-MSCs 2.59±0.25 95.86±0.53 1.56±0.28
培养过程中我们观察到, 随着传代次数增加细胞增殖逐渐变缓, hUC-MSCs的生长曲线也反映出P15代细胞增殖速率相较于P5代及P10代细胞更低(图3A)。因此, 为了验证hUC-MSCs是否在数次传代后发生衰老, 引发细胞生长阻滞, 我们使用流式细胞术检测了hUC-MSCs的细胞周期进程, 使用ModFit LT 4.1软件分别对不同代次细胞G1期、S期、G2期进行拟合(图3B), 统计各周期所占比例, 结果显示, 相对于P5代、P10代细胞, P15代hUC-MSCs中处于G1期的细胞比率显著升高(图3C, P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色也揭示了较高代次hUC-MSCs衰老细胞数目剧增。P5代hUC-MSCs中可见少量衰老细胞, P10代细胞中衰老细胞有所增加但无显著性差异, 至P15代时细胞衰老率则显著增高(图4A和图4B, P<0.05、P<0.01)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响[J]. 张权,张亚奇,饶巍,周端鹏,韩兵,武栋成. 中国细胞生物学学报. 2019(01)
本文编号：3250995
【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2020,42(04)CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
不同代次hUC-MSCs细胞衰老与凋亡检测
2.5 hUC-MSCs抑制PBMCs炎症因子的分泌表1 T淋巴细胞在hUC-MSCs作用下细胞周期的比例Table 1 Proportion of cell cycle in T lymphocytes treated with hUC-MSCs 组别Group S期/%S period /% G1期/%G1 period /% G2期/%G2 period /% PBMCs 1.25 ±0.78 97.24±1.35 1.51±0.62 PBMCs+PHA 31.39 ±1.44 64.10±0.72 4.51±0.72 +P5 hUC-MSCs 2.16 ±1.89 96.24±0.78 1.61±1.12 +P10 hUC-MSCs 2.76 ±0.45 96.32±0.11 1.06±0.13 +P15 hUC-MSCs 2.59±0.25 95.86±0.53 1.56±0.28
培养过程中我们观察到, 随着传代次数增加细胞增殖逐渐变缓, hUC-MSCs的生长曲线也反映出P15代细胞增殖速率相较于P5代及P10代细胞更低(图3A)。因此, 为了验证hUC-MSCs是否在数次传代后发生衰老, 引发细胞生长阻滞, 我们使用流式细胞术检测了hUC-MSCs的细胞周期进程, 使用ModFit LT 4.1软件分别对不同代次细胞G1期、S期、G2期进行拟合(图3B), 统计各周期所占比例, 结果显示, 相对于P5代、P10代细胞, P15代hUC-MSCs中处于G1期的细胞比率显著升高(图3C, P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色也揭示了较高代次hUC-MSCs衰老细胞数目剧增。P5代hUC-MSCs中可见少量衰老细胞, P10代细胞中衰老细胞有所增加但无显著性差异, 至P15代时细胞衰老率则显著增高(图4A和图4B, P<0.05、P<0.01)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响[J]. 张权,张亚奇,饶巍,周端鹏,韩兵,武栋成. 中国细胞生物学学报. 2019(01)
本文编号：3250995
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