针对抗体亲和配基筛选的STD-NMR方法学构建

发布时间：2021-06-26 00:41

　　生物医药领域的蓬勃发展推动着单克隆抗体下游纯化技术的不断进步。目前用于抗体纯化的蛋白A亲和配基,存在价格昂贵、配基脱落造成二次污染、配基稳定性差等问题。探索新型高品质亲和配基已成为抗体纯化亟待突破的瓶颈。多肽亲和配基可以弥补蛋白A配基的缺陷性,成为近些年的研究热点。但其设计方法属于虚筛,存在漏选、假阳性等问题。因此建立一种新型的配基精准筛选技术具有重要意义。核磁共振饱和转移差谱（Saturation transfer difference nuclear magnetic resonance spectroscopy,STD-NMR）具有可在真实吸附环境中实现筛选、蛋白大小不受尺寸限制等优点。因此,本文将该方法用于仿生多肽配基特异性的筛选方法建立,并以等温滴定量热法（Isothermal titration calorimetry,ITC）和石英晶体微天平（Quartz crystal microbalance with dissipation,QCM-D）从热力学和吸附层分子排布形式对STD-NMR方法进行了验证,最后将所筛选出的多肽亲和配基应用于抗体亲和介质的制备和抗体的纯化。本论... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院过程工程研究所)北京市

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第1章 引言
    1.1 前言
    1.2 单克隆抗体的应用前景
    1.3 抗体亲和配基的发展现状
        1.3.1 蛋白配基
        1.3.2 化学合成配基
        1.3.3 仿生多肽配基
    1.4 配基与蛋白质相互作用的研究方法
        1.4.1 核磁共振饱和转移差谱(STD-NMR)
        1.4.2 等温滴定量热法(ITC)
        1.4.3 石英晶体微天平(QCM)
    1.5 立题依据和目标
        1.5.1 立题依据
        1.5.2 研究目标
第2章 建立STD-NMR配基筛选方法学
    2.1 引言
    2.2 实验材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 核磁共振实验条件
        2.2.4 等温滴定量热法实验条件
        2.2.5 石英晶体微天平实验条件
        2.2.6 多肽配基的STD-NMR非竞争性滴定实验
        2.2.7 仿生多肽琼脂糖微球的制备
        2.2.8 亲和层析中多肽配基的非特异性评价
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 基于配基取向筛选的实验
        2.3.2 竞争性STD-NMR实验
        2.3.3 非竞争性STD-NMR滴定实验
        2.3.4 特异性和非特异性作用的热力学差异
        2.3.5 特异性和非特异性作用的吸附层分子排布形式差异
        2.3.6 将STD-NMR非竞争性滴定方法用于仿生多肽配基的筛选
    2.4 本章小结
第3章 多肽配基亲和介质分离纯化性能的评价
    3.1 引言
    3.2 实验材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的制备
        3.2.4 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的评价
        3.2.5 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的性能评价
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的制备
        3.3.2 亲和介质的色谱性能评价
        3.3.3 分离实际体系
    3.4 本章小结
第4章 结论和展望
    4.1 结论
    4.2 创新点
    4.3 展望
参考文献
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3250278