过表达原钙黏蛋白7对小鼠皮层神经元突起的影响
发布时间：2021-07-01 20:02
目的探讨过表达原钙黏蛋白7（Pcdh7）基因对小鼠原代皮层神经元突起发育的影响。方法体外原代培养C57/B6小鼠胚胎18.5 d的大脑皮层神经元,随机分为空白对照组、实验对照组（空载组）和过表达原钙黏蛋白7基因组（过表达组）。运用免疫细胞化学术检测神经元突起的标记物β-Tubulin Ⅲ的表达来反映各组培养的神经元轴突的长度和初级树突分支数,同时,采用Western blot检测各组神经元Pcdh7及磷酸化丝切蛋白的表达水平。结果过表达Pcdh7基因后,其皮层神经元轴突长度[（247.4±99.38）μm]显著高于对照组和实验对照组[分别为（179.4±97.91）μm和（172.1±65.20）μm],差异有统计学意义（P<0.01）,但其初级树突分支数（2.74±1.302）却明显低于对照组和空载组（分别为3.726±0.890和3.793±1.196）（P<0.01）;而Western blot结果显示,当原代培养的神经元过表达Pcdh7基因时,与对照组相比,其磷酸化丝切蛋白的表达水平明显降低（P<0.01）。结论在原代培养的小鼠皮层神经元中过表达Pcdh7基因...
【文章来源】：解剖学研究. 2020,42(03)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
3 组小鼠皮层神经元Pcdh7蛋白水平比较*与空白对照组相比，P<0.01；#与空载组相比，P<0.01
原代培养皮层神经元经相应病毒处理3 d后，免疫荧光标记体外培养的原代皮层神经元（E18.5 d的胎鼠）（图2）。过表达组的神经元轴突长度显著高于对照组和空载组（P<0.01），空载组与对照组之间的轴突长度无统计学意义（P>0.05）。过表达组的神经元初级树突分支数显著低于对照组和空载组（P<0.01），且空载组与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。2.3 各组原代皮层神经元p-Cofilin蛋白水平比较
神经系统的发育依靠细胞-细胞间相互作用进行调节，这种相互作用主要是由细胞粘附分子——钙黏蛋白介导的。原钙黏蛋白（Pcdhs）作为钙黏蛋白超家族中最大的亚家族，主要在中枢神经系统中表达，可分为簇状原钙黏蛋白和非簇状原钙黏蛋白[10]。Pcdh7作为非簇状原钙黏蛋白中δ1-Pcdhs家族的一员，对神经的发育过程具有重要作用，包括轴突引导[11]和突触发生[12]。既往研究显示，Pcdh7基因的异常表达与多种神经系统疾病密切相关[8-9,13]，但其在神经发育过程中所发挥的作用仍需进一步研究。本课题组前期研究结果表明，Pcdh7在小鼠大脑的发育过程中呈现时间空间特异性表达模式[14]。自胚胎期12.5 d开始，Pcdh7在小鼠大脑皮层中的相对表达量逐渐升高，至胚胎期18.5 d到达峰值，推测其可能在小鼠大脑皮层的发育过程中发挥作用。在皮层神经元中过表达Pcdh7导致神经元凋亡率明显升高，而在此基础上干扰Pcdh7的表达可适当降低神经元的凋亡率[5]。已有文献报道，在轴突引导因子Sema3a存在的情况下，Pcdh7在非洲蟾蜍中的异构体NF-Protocadherin表达水平明显上升，可显著升高其视网膜神经元生长锥发生崩塌的概率[15]。同样，本研究结果显示，与对照组相比，在小鼠皮层神经元中过表达Pcdh7能够显著促进轴突过度生长，同时抑制初级树突分支的产生，提示在小鼠皮层神经元中过表达Pcdh7基因会影响其轴突的正常发育。
【参考文献】：
期刊论文
[1]ICR小鼠脑发育过程中原钙黏蛋白7a表达及意义[J]. 肖华娟,亓月,李佳娜,熊轶. 中华实用诊断与治疗杂志. 2017(11)
本文编号：3259780
【文章来源】：解剖学研究. 2020,42(03)
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
3 组小鼠皮层神经元Pcdh7蛋白水平比较*与空白对照组相比，P<0.01；#与空载组相比，P<0.01
原代培养皮层神经元经相应病毒处理3 d后，免疫荧光标记体外培养的原代皮层神经元（E18.5 d的胎鼠）（图2）。过表达组的神经元轴突长度显著高于对照组和空载组（P<0.01），空载组与对照组之间的轴突长度无统计学意义（P>0.05）。过表达组的神经元初级树突分支数显著低于对照组和空载组（P<0.01），且空载组与对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。2.3 各组原代皮层神经元p-Cofilin蛋白水平比较
神经系统的发育依靠细胞-细胞间相互作用进行调节，这种相互作用主要是由细胞粘附分子——钙黏蛋白介导的。原钙黏蛋白（Pcdhs）作为钙黏蛋白超家族中最大的亚家族，主要在中枢神经系统中表达，可分为簇状原钙黏蛋白和非簇状原钙黏蛋白[10]。Pcdh7作为非簇状原钙黏蛋白中δ1-Pcdhs家族的一员，对神经的发育过程具有重要作用，包括轴突引导[11]和突触发生[12]。既往研究显示，Pcdh7基因的异常表达与多种神经系统疾病密切相关[8-9,13]，但其在神经发育过程中所发挥的作用仍需进一步研究。本课题组前期研究结果表明，Pcdh7在小鼠大脑的发育过程中呈现时间空间特异性表达模式[14]。自胚胎期12.5 d开始，Pcdh7在小鼠大脑皮层中的相对表达量逐渐升高，至胚胎期18.5 d到达峰值，推测其可能在小鼠大脑皮层的发育过程中发挥作用。在皮层神经元中过表达Pcdh7导致神经元凋亡率明显升高，而在此基础上干扰Pcdh7的表达可适当降低神经元的凋亡率[5]。已有文献报道，在轴突引导因子Sema3a存在的情况下，Pcdh7在非洲蟾蜍中的异构体NF-Protocadherin表达水平明显上升，可显著升高其视网膜神经元生长锥发生崩塌的概率[15]。同样，本研究结果显示，与对照组相比，在小鼠皮层神经元中过表达Pcdh7能够显著促进轴突过度生长，同时抑制初级树突分支的产生，提示在小鼠皮层神经元中过表达Pcdh7基因会影响其轴突的正常发育。
【参考文献】：
期刊论文
[1]ICR小鼠脑发育过程中原钙黏蛋白7a表达及意义[J]. 肖华娟,亓月,李佳娜,熊轶. 中华实用诊断与治疗杂志. 2017(11)
本文编号：3259780
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