人脂肪间充质干细胞条件培养基冻干粉促进皮肤成纤维细胞迁移、细胞外基质合成和抑制巨噬细胞炎症

发布时间：2021-07-02 11:01

　　目的探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基冻干粉（hADMSCs-CMLP）对成纤维细胞（HFF-1）迁移、细胞外基质合成水平的影响,以及对小鼠巨噬细胞（Raw264.7）炎症因子释放的影响。方法收集人脂肪间充质干细胞P3代细胞条件培养基上清液,经冷冻干燥后,获得冻干粉制剂。使用前用去离子水溶解,添加到人成纤维细胞HFF-1和小鼠巨噬细胞Raw264.7培养基中。用细胞划痕实验筛选冻干粉的浓度,用活细胞工作站和transwell方法检测人成纤维细胞迁移和细胞增殖情况;q RT-PCR法检测成纤维细胞细胞外基质蛋白纤维粘连蛋白、弹性蛋白、I型胶原蛋白、MMP-1的m RNA水平变化;ELISA法测定巨噬细胞Raw264.7炎症因子TNF-α、IL-6释放情况。结果分离传代培养后,得到的P3代hADMSCs呈长梭形漩涡状并贴壁生长,有立体感,其间充质干细胞表面标志性抗原CD73、CD90、CD105阳性表达率均大于95.00%,CD34、CD45、HLA-DR均小于2.00%;诱导培养21～28d后出现明显的成脂、成骨和成软骨细胞特性;细胞划痕实验显示50%的hADMSCs条件培养基冻干粉对成纤... 

【文章来源】：中国医药生物技术. 2020,15(05)

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

h ADMSCs表面标志物流式鉴定结果（A～C分别是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D～E分别是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)

图1 h ADMSCs表面标志物流式鉴定结果（A～C分别是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D～E分别是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)2.3 h ADMSCs条件培养基冻干粉促进成纤维细胞迁移

HFF-1细胞按上述方法处理后，活细胞工作站培养观察24 h，明显能看到细胞在加入50%的冻干粉后，实验组HFF-1基本长满圆形空白部分，对照组HFF-1还有很大空白（图4B）。说明冻干粉能显著促进HFF-1细胞迁移。相同的处理方法接种于96孔板，培养24 h后，酶标仪检测显示添加50%的冻干粉，HFF-1细胞ATP含量相对于对照组无明显增高，表明冻干粉对成纤维细胞是促进迁移，而非增殖（图4A和C）。另外用transwell方法，可以观察到细胞向含有50%h ADMSCs-CMLP培养基下层迁移，结晶紫染色明显能看到下层膜细胞变多，统计学差异显著（n=3）（图4D～F）。2.4 h ADMSCs条件培养基冻干粉对HFF-1细胞外基质基因表达的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]人脐带间充质干细胞对人真皮成纤维细胞增殖和细胞外基质基因表达的影响[J]. 章毅,陈侃俊,伍婷,祁成,金魏名,孔凡瑞,陈亮.  中国医药生物技术. 2019(03)
[2]人脂肪干细胞及外泌体冻干粉的安全性[J]. 李洪超,金银鹏,王皙,李莉,傅青春.  中国组织工程研究. 2018(29)



本文编号：3260344