抗人转化生长因子β1纳米抗体的制备及功能鉴定

发布时间：2021-07-14 20:26

　　目的制备并鉴定羊驼来源的高特异性、高亲和力的抗人转化生长因子β1（TGF-β1）的纳米抗体。方法构建真核表达质粒并瞬时转染人胚胎肾上皮细胞HEK-293T,获得重组TGF-β1蛋白;用该蛋白混合弗氏佐剂免疫羊驼,分离外周血单核细胞,提取RNA进行巢式PCR,扩增抗体重链可变区（VHH）,并构建VHH噬菌体展示文库;利用ELISA筛选能与TGF-β1重组蛋白特异性结合的抗体株,原核表达并纯化抗TGF-β1的纳米抗体;利用免疫印迹、免疫荧光和ForteBio Octer?等方法鉴定纳米抗体的特异性及亲和力。结果成功构建cFUGW-TGF-β1表达载体并纯化了3 mg TGF-β1蛋白;羊驼经过5次免疫后得到容量为1.2×10⁸的TGF-β1-VHH噬菌体展示文库;通过4轮ELISA筛选,得到7株能与重组TGF-β1蛋白特异性结合的抗体株;免疫印迹及免疫荧光实验结果均显示原核表达纯化的TGF-β1纳米抗体B3和C8能特异性识别肺癌细胞系NCI-H520表达的天然TGF-β1;ForteBio Octer?结果显示B3、C8与重组TGF-β1的亲和力分别达到1.48×10... 

【文章来源】：基础医学与临床. 2020,40(05)CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

重组TGF-β1的纯化与鉴定

经PCR扩增的人TGF-β1标准全长DNA序列,长度为1 188 bp(图1A);双酶切鉴定显示3 518 bp和6 895 bp的两条条带(图1B),提示cFUGW-TGF-β1重组质粒构建成功。2.2 重组TGF-β1蛋白的表达纯化及鉴定

ELLSA检测随机挑选的21株克隆与重组TGF-β1蛋白的结合情况,筛选得到B3、C5、C8、F4、F6、G6和G8,7株阳性克隆(图5)。图3 重组TGF-β1的纯化与鉴定


本文编号：3284836