寨卡病毒抑制内皮转运体Mfsd2a及其致病机制研究
发布时间：2021-07-22 07:02
寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）为黄病毒科中新兴的虫媒病毒,主要通过蚊虫叮咬传播给人类。和大多数黄病毒科成员不同的是,ZIKV可通过性行为、输血或者体液接触等多种途径在人与人之间传播。在近期的流行中,ZIKV感染引起的新生儿小头症数量急剧增加,受到了全球的广泛关注。ZIKV感染怀孕的女性后,可将病毒垂直传播给下一代,感染所致的胎儿及新生儿小头症对人类的健康造成了巨大的威胁。有研究显示,ZIKV能够直接感染并穿过血脑屏障（Blood Brain Barrier,BBB）,并改变小鼠大脑脉管系统的完整性,导致BBB的渗漏、神经前体细胞（Neural precursor cells,NPCs）细胞周期阻滞和凋亡以及大量神经元死亡。组成BBB的大脑微血管内皮细胞表面表达多种特异性的转运体,负责将循环系统中的二十二碳六烯酸（Docosahexaenoicacid,DHA）和糖类等营养物质转运入脑。DHA为大脑发育和维持大脑正常功能所必需的,由于大脑本身不能合成DHA,血液中的DHA主要以LPC-DHA的形式利用大脑内皮细胞上特异性转运体Mfsd2a转运入脑。Mfsd2a作为DHA的转运...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２：?ｈＢＭＥＣｓ表达内皮细胞标志物ＣＤ３１
染低传代ｈＢＭＥＣ细胞，感染４８ｈ后，利用免疫荧光实验检测ＺＩＫＶ感染ｈＢＭＥＣ??细胞的情况。结果显示，ＺＩＫＶ成功的感染了?ｈＢＭＥＣ细胞，ＺＩＫＶＥ阳性细胞数量??与病毒感染剂量呈梯度依赖性，如图３。??ＭＯＩ０?ＭＯＩ?０．１?ＭＯＭ??ａｎ??图３：免疫荧光染色检测ＺＩＫＶ感染后ｈＢＭＥＣ细胞中ＺＩＫＶＥ蛋白的表达水平。ｈＢＭＥＣ细胞??分别感染两种ＺＩＫＶ病毒株ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９，?ＭＯＩ为０、０．１和１，感染４８ｈ后用ＺＩＫＶ??Ｅ特异性抗体进行免疫荧光染色，检测ＺＩＫＶ病毒的感染情况。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＺＩＫＶ?Ｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｈＢＭＥＣｓ?ａｆｔｅｒ?ＺＩＫＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．?Ｔｈｅ?ｈＢＭＥＣｓ??ｗｅｒｅ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＺＩＫＶ?ＳＺ０１?ｓｔｒａｉｎｓ?ａｎｄ?ＰＲＶＡＢＣ５９?ｓｔａｉｎｓ?ａｔ?ＭＯＩ?ｏｆ?０，?０．１，?１?ｆｏｒ?４８?ｈ?ｂｙ??ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＺＩＫＶ?Ｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??为了检测ＺＩＫＶ感染对ｈＢＭＥＣ细胞活力的影响，将ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９病毒??株用ＤＭＥＭ基础培养基进行５倍梯度稀释，以ＭＯＩ为０，?０．２，?１和５感染ｈＢＭＥＣ??细胞４８ｈ，检测在不同剂量下，病毒感染对细胞形态及细胞活力的影响。如图４ａ所??示，ＺＩＫＶ感染后细胞形态和未感染组细胞形态相似，即使在较高感染剂量下??（ＭＯＩ＝５）
为了检测ＺＩＫＶ感染对ｈＢＭＥＣ细胞活力的影响，将ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９病毒??株用ＤＭＥＭ基础培养基进行５倍梯度稀释，以ＭＯＩ为０，?０．２，?１和５感染ｈＢＭＥＣ??细胞４８ｈ，检测在不同剂量下，病毒感染对细胞形态及细胞活力的影响。如图４ａ所??示，ＺＩＫＶ感染后细胞形态和未感染组细胞形态相似，即使在较高感染剂量下??（ＭＯＩ＝５），细胞形态仍无明显改变，如图４ａ。通过检测细胞活力发现，以未感染??组细胞活力值为１００％，无论在ＺＩＫＶ低剂量还是高剂量感染后，病毒感染的ｈＢＭＥＣ??细胞的活力均在９０％以上，如图４ｂ。??４２??
本文编号：3296686
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【文章页数】：99 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２：?ｈＢＭＥＣｓ表达内皮细胞标志物ＣＤ３１
染低传代ｈＢＭＥＣ细胞，感染４８ｈ后，利用免疫荧光实验检测ＺＩＫＶ感染ｈＢＭＥＣ??细胞的情况。结果显示，ＺＩＫＶ成功的感染了?ｈＢＭＥＣ细胞，ＺＩＫＶＥ阳性细胞数量??与病毒感染剂量呈梯度依赖性，如图３。??ＭＯＩ０?ＭＯＩ?０．１?ＭＯＭ??ａｎ??图３：免疫荧光染色检测ＺＩＫＶ感染后ｈＢＭＥＣ细胞中ＺＩＫＶＥ蛋白的表达水平。ｈＢＭＥＣ细胞??分别感染两种ＺＩＫＶ病毒株ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９，?ＭＯＩ为０、０．１和１，感染４８ｈ后用ＺＩＫＶ??Ｅ特异性抗体进行免疫荧光染色，检测ＺＩＫＶ病毒的感染情况。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＺＩＫＶ?Ｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｈＢＭＥＣｓ?ａｆｔｅｒ?ＺＩＫＶ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．?Ｔｈｅ?ｈＢＭＥＣｓ??ｗｅｒｅ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＺＩＫＶ?ＳＺ０１?ｓｔｒａｉｎｓ?ａｎｄ?ＰＲＶＡＢＣ５９?ｓｔａｉｎｓ?ａｔ?ＭＯＩ?ｏｆ?０，?０．１，?１?ｆｏｒ?４８?ｈ?ｂｙ??ｉｍｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ＺＩＫＶ?Ｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??为了检测ＺＩＫＶ感染对ｈＢＭＥＣ细胞活力的影响，将ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９病毒??株用ＤＭＥＭ基础培养基进行５倍梯度稀释，以ＭＯＩ为０，?０．２，?１和５感染ｈＢＭＥＣ??细胞４８ｈ，检测在不同剂量下，病毒感染对细胞形态及细胞活力的影响。如图４ａ所??示，ＺＩＫＶ感染后细胞形态和未感染组细胞形态相似，即使在较高感染剂量下??（ＭＯＩ＝５）
为了检测ＺＩＫＶ感染对ｈＢＭＥＣ细胞活力的影响，将ＳＺ０１和ＰＲＶＡＢＣ５９病毒??株用ＤＭＥＭ基础培养基进行５倍梯度稀释，以ＭＯＩ为０，?０．２，?１和５感染ｈＢＭＥＣ??细胞４８ｈ，检测在不同剂量下，病毒感染对细胞形态及细胞活力的影响。如图４ａ所??示，ＺＩＫＶ感染后细胞形态和未感染组细胞形态相似，即使在较高感染剂量下??（ＭＯＩ＝５），细胞形态仍无明显改变，如图４ａ。通过检测细胞活力发现，以未感染??组细胞活力值为１００％，无论在ＺＩＫＶ低剂量还是高剂量感染后，病毒感染的ｈＢＭＥＣ??细胞的活力均在９０％以上，如图４ｂ。??４２??
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