EGF诱导人胚肺成纤维细胞衰老的机制研究

发布时间：2021-07-28 05:16

　　研究背景与目的:细胞衰老是细胞发生不可逆的生长停滞的现象。衰老细胞具有一系列的特征,如β-半乳糖苷酶活性升高、DNA损伤累积、衰老相关的异染色质凝集点（SAHF）增加及衰老相关蛋白的表达增加等。表皮生长因子EGF是一个重要的有丝分裂原,目前大多数的研究表明EGF能够抑制细胞衰老、延长细胞寿命,仅有少数研究提出EGF能够抑制细胞生长、诱导细胞衰老或凋亡,但其中的机制尚未被阐明。本研究发现EGF能够诱导人胚肺成纤维细胞IMR90发生衰老,所以本课题主要对EGF诱导IMR90细胞衰老的机制进行了探究。研究方法与结果:在本研究中,我们发现EGF能够诱导IMR90细胞发生衰老。首先,细胞生长曲线和Brd U掺入实验证明了EGF处理抑制了IMR90细胞的生长。通过观察,发现经EGF处理的细胞呈现出衰老细胞的表征,SA-β-gal染色和DAPI染色的结果表明EGF诱导IMR90细胞发生了衰老。在此基础上,免疫荧光和免疫印迹技术的检测结果显示,53BP1凝集点形成,γH2A.X和53BP1蛋白水平上调,表明EGF处理引发了DNA损伤反应;p38、p-p38、p53、p-p53、p21和p16蛋白水平上... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

衰老相关信号通路图

EGF 诱导人胚肺成纤维细胞衰老的机制研究制 IMR90 细胞增殖的作用，我们进行了 BrdU 掺入实验。结果如示，与对照组相比，EGF 处理组（30 nM 和 100 nM）中 BrdU为绿色的细胞）的数量降低，且这种现象随着 EGF 浓度的增EGF 降低了 IMR90 细胞的增殖能力。综合以上结果，我们得知IMR90 细胞的生长。

2.3.2 EGF 通过诱导 IMR90 细胞衰老抑制其生长2.3.2.1 EGF 诱导 IMR90 细胞发生衰老通过观察，我们发现 EGF 处理后的细胞体积变大、呈扁平状，与衰老细胞的形态特征相似。因此，我们猜测 EGF 可能诱导 IMR90 细胞发生了衰老，从而影响了细胞的增殖。为了验证这一猜想，我们检测了衰老标志物——衰老相关的β-半乳糖苷酶和SAHF来确定细胞的衰老情况。将IMR90细胞用不同浓度的EGF（3~300 nM）处理 3 天，然后对其进行 SA-β-gal 染色和 DAPI 染色。结果如图2.2 所示，与对照组相比，EGF 处理组的 SA-β-gal 阳性细胞和 SAHF 阳性细胞随EGF 浓度的增加而增加，且在 100 nM 处差异最为显著（后续研究选择 100 nM作为 EGF 的作用浓度）。以上结果表明，EGF 诱导 IMR90 细胞发生了衰老。


本文编号：3307294