T细胞胸腺选择人源化小鼠模型建立及免疫耐受机制研究
发布时间：2021-09-25 16:47
实验背景:人类自身免疫性疾病越来越普遍,一方面原因是由于在整个基因库中保留了许多易感基因,另一方面原因是在过去一个世纪中出现了新的环境因素变化。这些疾病是由不受控制的自身反应性T细胞引起的,其存在于患者和许多无症状个体的外周血液循环中,可归因于不完全的胸腺选择过程。T细胞在胸腺发育期间获得T细胞受体（TCR）,于皮质中与自身MHC结合进行阳性选择,而后于髓质中与MHC/自身肽复合物结合进行阴性选择,导致清除大多数自身反应性T细胞,其余成熟T细胞可以释放到外周。我们对胸腺选择机制的了解大多来自于动物模型。一些对人类在心脏手术期间被摘除的胸腺组织进行的研究,提供了关于人胸腺细胞表型和分布的一些信息,对其功能研究的见解有限。然而,除了血液样本之外,人体免疫细胞和组织的纵向研究是不可行的,并且使用人胸腺组织来评估与其抗原特异性相关的胸腺细胞的发育和命运是具有挑战性的。现在有可能从单个人供体获取胸腺组织和造血干细胞（HSC）,产生多个“相同”的人源化小鼠,这些小鼠允许纵向研究以及各种操作,例如将特定TCR和/或抗原引入造血干细胞中,这将在小鼠上重建人类免疫系统。这种体内模型为研究人类自身反应性T...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TCR与MHC-自身多肽复合物的亲和力与T细胞最终命运关系
5图 2 中枢选择的细胞类型以及阳性选择和克隆清除机制[Cold Spring Harb Perspect Biol. 2012, 4(6):997-1001.]1.2.2 胸腺内的抗原呈递细胞：髓质胸腺上皮细胞（mTECs）髓质胸腺上皮细胞在胸腺耐受中发挥至关重要的作用，由于它们表达大量组织特异性自身抗原（TSAs）,所以在胸腺抗原呈递细胞中表现出独特的特性[15] [16]。髓质胸腺上皮细胞还表达一种称为自身免疫调节因子（AIRE）的核内调节蛋白，该基因的突变会导致多器官综合征，如自身免疫性多发性内分泌病-念珠菌病-外胚层营养不良综
-黑素瘤细胞Mel-A375，并测试它们是否具有刺激MART1 TCR T细胞活化及杀伤肿瘤细胞的功能（图2.1）。MART1A27L蛋白为含有MART1抗原肽的完整蛋白，该蛋白和Mart1抗原肽均能够被肿瘤细胞加工并呈递给MART1-TCR特异性T细胞识别。识别活化的T细胞表现为TCR、GFP和Ki-67表达上调。本实验选用了转导MART1多肽建立模型。编码MART1-TCR和MART1肽的慢病毒载体（图2.2D）用于转导造血干细胞，其转导效率高达90%以上（图2.2E）。实验组及对照组人源化小鼠的构建策略（图2.2F）所示。MART1抗原肽实验组小鼠尾静脉同时输注1×105转导MART1 TCR基因的造血干细胞和1×105转导MART1抗原肽基因的造血干细胞。另一组为对照组小鼠将同时输注1×105转导Mart-1 TCR基因的造血干细胞和1×105转导对照慢病毒的造血干细胞。随时间评估外周血中T细胞，B细胞和CD11c+细胞的百分比以及MART1反应性T细胞（Tet+细胞）的百分比，各群细胞划定方法如图所示（图2.3G）。由于人胸腺组织的移植不良而导致个别具有低嵌合状态的小鼠被排除（图2.3H）两组中的小鼠在重建后8周显示约有50％的人细胞重建（图2.4A）。随着胚胎胸腺移植物的生长，人T细胞在小鼠血液中的百分比随时间推移逐渐增多（图2.4B），导致人B细胞比例的相对降低（图2.4C）。人CD11c+细胞的百分比在CD45+细胞中约为4％，随时间推移保持稳定（图2.4D）。重要的是
本文编号：3410089
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：109 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TCR与MHC-自身多肽复合物的亲和力与T细胞最终命运关系
5图 2 中枢选择的细胞类型以及阳性选择和克隆清除机制[Cold Spring Harb Perspect Biol. 2012, 4(6):997-1001.]1.2.2 胸腺内的抗原呈递细胞：髓质胸腺上皮细胞（mTECs）髓质胸腺上皮细胞在胸腺耐受中发挥至关重要的作用，由于它们表达大量组织特异性自身抗原（TSAs）,所以在胸腺抗原呈递细胞中表现出独特的特性[15] [16]。髓质胸腺上皮细胞还表达一种称为自身免疫调节因子（AIRE）的核内调节蛋白，该基因的突变会导致多器官综合征，如自身免疫性多发性内分泌病-念珠菌病-外胚层营养不良综
-黑素瘤细胞Mel-A375，并测试它们是否具有刺激MART1 TCR T细胞活化及杀伤肿瘤细胞的功能（图2.1）。MART1A27L蛋白为含有MART1抗原肽的完整蛋白，该蛋白和Mart1抗原肽均能够被肿瘤细胞加工并呈递给MART1-TCR特异性T细胞识别。识别活化的T细胞表现为TCR、GFP和Ki-67表达上调。本实验选用了转导MART1多肽建立模型。编码MART1-TCR和MART1肽的慢病毒载体（图2.2D）用于转导造血干细胞，其转导效率高达90%以上（图2.2E）。实验组及对照组人源化小鼠的构建策略（图2.2F）所示。MART1抗原肽实验组小鼠尾静脉同时输注1×105转导MART1 TCR基因的造血干细胞和1×105转导MART1抗原肽基因的造血干细胞。另一组为对照组小鼠将同时输注1×105转导Mart-1 TCR基因的造血干细胞和1×105转导对照慢病毒的造血干细胞。随时间评估外周血中T细胞，B细胞和CD11c+细胞的百分比以及MART1反应性T细胞（Tet+细胞）的百分比，各群细胞划定方法如图所示（图2.3G）。由于人胸腺组织的移植不良而导致个别具有低嵌合状态的小鼠被排除（图2.3H）两组中的小鼠在重建后8周显示约有50％的人细胞重建（图2.4A）。随着胚胎胸腺移植物的生长，人T细胞在小鼠血液中的百分比随时间推移逐渐增多（图2.4B），导致人B细胞比例的相对降低（图2.4C）。人CD11c+细胞的百分比在CD45+细胞中约为4％，随时间推移保持稳定（图2.4D）。重要的是
本文编号：3410089
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