人致病性呼肠孤病毒μNS互作蛋白的筛选与鉴定

发布时间：2021-10-25 05:23

　　目的:通过免疫荧光技术应用共聚焦显微镜观察纳尔逊海湾病毒（NBV）感染的细胞中μNS蛋白的定位情况。通过免疫荧光技术应用共聚焦显微镜观察单独转染M3质粒的细胞中μNS蛋白的形成包涵体的情况。利用质谱分析技术对人致病性呼肠孤病毒μNS蛋白的宿主互作蛋白进行筛选及分析鉴定,明确未知蛋白的氨基酸序列及结构,推断其在病毒感染复制过程中的作用,为深入研究纳尔逊海湾病毒及正呼肠孤病毒对人类致病机制提供理论依据。方法:本研究通过免疫荧光方法在共聚焦显微镜下观察了μNS蛋白在NBV感染的细胞中的定位。为了确定μNS蛋白在病毒包涵体样结构中定位,本研究将人致病性呼肠孤病毒以0.1PFU/细胞的感染复数（MOI）感染了L929细胞,孵育24小时,先后用μNS多克隆抗体和Alexa 488的羊抗兔抗体对μNS蛋白进行免疫染色,免疫染色后用共聚焦显微镜观察。为了证明当在没有其他NBV病毒蛋白表达的情况下,μNS可以形成病毒包涵体样结构,本研究用pEFHAMBM3质粒（含有来自NBV病毒的M3基因的表达载体）转染L929细胞,通过免疫荧光的方法在共聚焦显微镜下观察μNS在细胞中的分布。为了得到人致病性呼肠孤病毒... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

westernblot检测M3质粒转染M:Marker;1：10μL对照组蛋白样本；2:20μL对照组蛋白样本；3:10μL实验组样本；

AMB感染L929细胞形成包涵体结构

11图 2B M3 转染的 L929 细胞中 MB μNS 的表达检测免疫沉淀后μNS 的表达及其互作蛋染后所得蛋白样本进行免疫沉淀，用含有 HA 抗蛋白，同时和μNS 互作的蛋白也应该同时被沉结果，HA 抗体磁珠加入前取 20μL 进行蛋白印μNS 表达。结果显示可见μNS 有表达（见图 3可以通过银染来确定。


本文编号：3456734