重组酿酒酵母表达幽门螺杆菌VacA蛋白及其免疫原性分析

发布时间：2021-10-24 18:57

　　目的:利用酿酒酵母表面展示技术筛选幽门螺杆菌候选疫苗,并分析其免疫原性。方法:以幽门螺杆菌的空泡型细胞毒素A（vac A）基因作为研究对象,构建重组S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA,通过Western blot、免疫荧光标记和流式细胞仪对S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA进行体外表达分析。以PBS和S.cerevisiae EBY100/pYD1为对照组,S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA为实验组,口服免疫SPF级BALB/c小鼠。通过ELISA分析检测口服免疫后小鼠抗VacA特异性IgG及分泌型IgA效价。结果:VacA抗原蛋白被成功地展示在S.cerevisiae EBY100表面。小鼠经口服免疫S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA后可诱导产生较高的VacA特异性抗体。结论:表面展示型酿酒酵母可以作为幽门螺杆菌候选疫苗的递送载体,与此同时,这也为开发其他细菌或病毒疫苗提供新思路。 

【文章来源】：中国生物工程杂志. 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

免疫荧光分析

以Hp SS1基因组DNA作为模板，用vacA特异性引物进行PCR扩增并进行琼脂糖凝胶电泳，所得结果如图1所示。扩增产物条带长度约为762bp，与预期结果一致，表明vacA基因已扩增成功。2.2 重组表达质粒p YD1-VacA双酶切鉴定

vac A基因与pYD1质粒连接并转化到E.coli DH5α感受态细胞中，筛选获得阳性克隆E.coli DH5α/p YD1-Vac A。提取重组质粒p YD1-VacA并进行双酶切鉴定。结果如图2所示。图中出现两条带，而且与质粒和vac A基因大小(约762bp)相符。2.3 S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA的PCR鉴定

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3455806