脂肪干细胞的分离提取及诱导分化为雪旺样细胞的特性研究
发布时间：2021-11-15 08:17
目的:探讨经Ⅰ型胶原酶消化法提取的SD大鼠原代脂肪干细胞（ADSCs）,诱导分化为雪旺样细胞（d ADSCs）,比较ADSCs分化前后细胞形态、染色特性及细胞表面特征分子、嘌呤受体P2X7,髓鞘蛋白P0和神经营养因子及相应受体的表达变化,从而观察ADSCs是否具有向雪旺细胞（SCs）的分化潜能并具有修复神经损伤的必要的物质,为临床ADSCs用于修复神经损伤提供实验依据。方法:雄性SD大鼠,体重300±10g,无菌条件下解剖取大鼠腹股沟处脂肪组织,经Ⅰ型胶原酶消化后离心,200目细胞筛过滤,接种培养。通过差速贴壁法纯化细胞,传至第3代后开始用于实验。MTT法检测第3代、第5代、第7代、第9代和第13代细胞活性。选用第3代ADSCs细胞用于实验。流式细胞术检测ADSCs表面特征分子CD29,CD44,CD45和CD90,根据其阳性表达率鉴定ADSCs特性。u ADSCs以2×105/m L的密度铺六孔板,用1m Mβ-巯基乙醇处理24 h,35 ng/m L全反式维甲酸处理72 h,5 ng/m LPDGF、10ng/m Lb FGF、14u Mforskolin、200ng/m L he...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外周神经损伤，雪旺细胞促轴突生长，形成髓鞘示意图
兰州大学硕士学位论文 脂肪干细胞的分离提取及诱导分化为雪旺样细胞的特性研究第三章 实验结果3.1 ADSCs 的形态特征本实验采用 SD 大鼠为研究对象，提取分离大鼠 ADSCs，Ⅰ型胶原酶消化法对大鼠脂肪组织消化，离心过滤后提取的原代 ADSCs 见图 A，ADSCs 与许多杂细胞一起漂浮，均为圆形；24 h 细胞换半液后，多数 ADSCs 已经贴壁生长如图B 所示：细胞为圆形，含有少许未贴壁的杂细胞，未贴壁的 ADSCs 和其他杂细胞减少；48 h 换液后见图 C，细胞已经全部贴壁，成短梭形、星型结构及不规则多角形等结构，成纤维状，纺锤形或聚集成片状。细胞开始快速增长，待长 5～7 d 后，细胞铺满细胞瓶底后按照 1:2 比例传代，第一代 ADSCs 见图 D，ADSCs是长梭形，少部分多角形等结构。
兰州大学硕士学位论文 脂肪干细胞的分离提取及诱导分化为雪旺样细胞的特性研究3.2 MTT 比色法测定 ADSCs 生长活力MTT 法测定 ADSCs 生长曲线呈 S 形 24h 后细胞进入快速增长期，24 h-48 之间细胞生长缓慢，进入平台期。72 h 后细胞增殖并进入对数生长期，在第 5 天时细胞生长达到峰值后，生长活性开始下降。此外，通过比较 P3、P5、P7、P和 P13 代的 ADSCs 生长活性的测定发现 P3 细胞生长活性最强，而 P13 生长活性最差，说明传代次数越多，细胞生长活力越低。复苏后 P3 代细胞，MTT 检测发现，在细胞生长增殖及形态特征方面和冻存前没有区别，但是平台期较长，在第 3 天进入快速增长期，第 5 天细胞生长达到最大，随后缓慢生长。ADSCs 形态稳定，生长活性不因冻存而改变，可以稳定遗传。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Chronically denervated distal nerve stump inhibits peripheral nerve regeneration[J]. Giulia Ronchi,Stefania Raimondo. Neural Regeneration Research. 2017(05)
[2]Current progress in use of adipose derived stem cells in peripheral nerve regeneration[J]. Shomari DL Zack-Williams,Peter E Butler,Deepak M Kalaskar. World Journal of Stem Cells. 2015(01)
[3]Ursolic acid induces neural regeneration after sciatic nerve injury[J]. Biao Liu,Yan Liu,Guang Yang,Zemin Xu,Jiajun Chen. Neural Regeneration Research. 2013(27)
博士论文
[1]人脂肪间充质干细胞向雪旺细胞的诱导分化及对外周面神经损伤修复的实验研究[D]. 李阳.北京协和医学院 2013
本文编号：3496396
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
外周神经损伤，雪旺细胞促轴突生长，形成髓鞘示意图
兰州大学硕士学位论文 脂肪干细胞的分离提取及诱导分化为雪旺样细胞的特性研究第三章 实验结果3.1 ADSCs 的形态特征本实验采用 SD 大鼠为研究对象，提取分离大鼠 ADSCs，Ⅰ型胶原酶消化法对大鼠脂肪组织消化，离心过滤后提取的原代 ADSCs 见图 A，ADSCs 与许多杂细胞一起漂浮，均为圆形；24 h 细胞换半液后，多数 ADSCs 已经贴壁生长如图B 所示：细胞为圆形，含有少许未贴壁的杂细胞，未贴壁的 ADSCs 和其他杂细胞减少；48 h 换液后见图 C，细胞已经全部贴壁，成短梭形、星型结构及不规则多角形等结构，成纤维状，纺锤形或聚集成片状。细胞开始快速增长，待长 5～7 d 后，细胞铺满细胞瓶底后按照 1:2 比例传代，第一代 ADSCs 见图 D，ADSCs是长梭形，少部分多角形等结构。
兰州大学硕士学位论文 脂肪干细胞的分离提取及诱导分化为雪旺样细胞的特性研究3.2 MTT 比色法测定 ADSCs 生长活力MTT 法测定 ADSCs 生长曲线呈 S 形 24h 后细胞进入快速增长期，24 h-48 之间细胞生长缓慢，进入平台期。72 h 后细胞增殖并进入对数生长期，在第 5 天时细胞生长达到峰值后，生长活性开始下降。此外，通过比较 P3、P5、P7、P和 P13 代的 ADSCs 生长活性的测定发现 P3 细胞生长活性最强，而 P13 生长活性最差，说明传代次数越多，细胞生长活力越低。复苏后 P3 代细胞，MTT 检测发现，在细胞生长增殖及形态特征方面和冻存前没有区别，但是平台期较长，在第 3 天进入快速增长期，第 5 天细胞生长达到最大，随后缓慢生长。ADSCs 形态稳定，生长活性不因冻存而改变，可以稳定遗传。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Chronically denervated distal nerve stump inhibits peripheral nerve regeneration[J]. Giulia Ronchi,Stefania Raimondo. Neural Regeneration Research. 2017(05)
[2]Current progress in use of adipose derived stem cells in peripheral nerve regeneration[J]. Shomari DL Zack-Williams,Peter E Butler,Deepak M Kalaskar. World Journal of Stem Cells. 2015(01)
[3]Ursolic acid induces neural regeneration after sciatic nerve injury[J]. Biao Liu,Yan Liu,Guang Yang,Zemin Xu,Jiajun Chen. Neural Regeneration Research. 2013(27)
博士论文
[1]人脂肪间充质干细胞向雪旺细胞的诱导分化及对外周面神经损伤修复的实验研究[D]. 李阳.北京协和医学院 2013
本文编号：3496396
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/jichuyixue/3496396.html
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