家蝇几丁质酶基因8（MDCht8）的cDNA克隆及功能初探

发布时间：2022-01-11 20:52

　　目的从家蝇的EST测序数据库中筛选获得家蝇几丁质酶基因8（MDCht8）,对其进行分子特性分析,探讨Cht8基因在家蝇不同组织和发育时期的时空表达模式及其在家蝇免疫防御中的功能。方法克隆MDCht8基因,借助MEGA 5.0软件采用邻接法构建系统进化树;采用实时荧光定量PCR检测MDCht8基因时空表达模式及微生物诱导后不同时间点（3、6、12、18、24、36、48h）MDCht8基因表达水平的变化。结果 MDCht8基因的ORF框全长1 512bp,编码一个含503个氨基酸的蛋白多肽,理论相对分子质量约为56.801 7×10³,进化树分析显示该蛋白与果蝇Cht8遗传距离较近。时空表达模式分析显示,MDCht8基因在2龄幼虫和3龄幼虫内表达量较高,家蝇3龄幼虫的各主要组织中以唾液腺和中肠中的表达水平较高。经白色念珠菌和大肠埃希菌诱导后,家蝇MDCht8基因出现明显上调,金黄色葡萄球菌诱导后未表现出明显上调。成功克隆了MDCht8基因,PCR扩增片段为1 512bp,与预期相符。结论初步揭示了MDCht8基因在家蝇不同虫期,不同组织表达量不同,提示几丁质酶基因在... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2020,15(02)北大核心CSCD

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【部分图文】：

BLAST中MDCht8基因保守结构域分析

MDCht8进化树绘制所选序列分别来自家蝇（Musca domestica,MD），果蝇（Drosophila melanogaster,DM），冈比亚按蚊（Anopheles gambiae,Ag），赤拟谷盗（Tribolium castaneum,Tc），桔小实蝇（Bactrocera dorsalis,Bd），水稻条茎螟（Chilo suppressalis,Cs）。进化树显示，MDCht8属于几丁质酶第4组，与果蝇的DmCht8遗传距离较近（图2）。2 MDCht8基因cDNA克隆

MD-Cht8基因在家蝇的卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和雌雄蝇各生长阶段中有不同程度的表达，以卵期作为参照，1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、蛹和雄蝇上调倍数均有统计学意义（P<0.05）。MDCht8基因表达程度：2龄幼虫>3龄幼虫>1龄幼虫>雄虫>蛹>雌虫>卵（图4）。图4 家蝇生活史不同发育期MDCht8基因的表达情况


本文编号：3583444