抗iLRP单克隆抗体的制备和鉴定

发布时间：2022-07-07 08:38

　　为了研究抗iLRP （Immature laminin receptor protein）单克隆抗体在免疫治疗中的应用,本研究采用重组iLRP对6～8周龄BALB/c雌性小鼠进行免疫,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合,在HAT （Hypoxanthine aminopterin thymidine）半固体培养基上挑选分离明显的细胞克隆于96孔板培养后,取上清液通过ELISA法进行克隆筛选,初次筛选得到23株阳性克隆,复筛后得到13株稳定分泌抗体的细胞株。抗体类别鉴定显示,其中9株为IgM,3株为Ig G1,1株为IgG2a,轻链类型都为κ型。其中1株IgG1和IgG2a用于制备小鼠腹水,经Protein-G柱纯化,SDS-PAGE检测抗体纯度,Western blotting验证抗体特异性。结果表明,抗体纯度均大于90%,并与i LRP有明显的特异性结合。此结果为后续的深入研究提供了一套完整有效的抗iLRP单克隆抗体生产和鉴定的程序,对以iLRP为治疗靶点的单克隆药物研究以及最近兴起的CAR-T （Chimeric antigen receptor modifie... 

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【文章目录】：
1 结果与分析
    1.1 杂交瘤细胞株的获得
    1.2 抗体亚类鉴定
    1.3 抗体的纯度分析和滴度测定
    1.4 抗体特异性分析
2 讨论
3 材料与方法
    3.1 主要材料与试剂
    3.2 小鼠免疫
    3.3 杂交瘤细胞株的建立
    3.4 抗体亚类鉴定
    3.5 小鼠腹水的制备和抗体纯化
    3.6 纯化抗体的滴度测定
    3.7 抗体特异性分析



本文编号：3656098