布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a抗原的克隆表达及其抗原性鉴定

发布时间：2022-10-18 19:38

　　目的构建和原核表达布鲁氏菌膜蛋白Omp2a,并进行抗原性鉴定。方法将布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a基因连接到pET-30α原核表达载体上,转化到大肠埃希菌菌株BL21内。重组蛋白rOmp2a经IPTG诱导,亲和层析纯化后用SDS-PAGE凝胶电泳分离,确定目的蛋白的大小和表达丰度。通过Western blot与患者血清反应,确定重组rOmp2a的抗原性及诊断价值。结果成功构建布鲁氏菌外膜蛋白Omp2a的原核表达系统,测序表明阅读框架正确。用IPTG可诱导高表达Omp2a,SDS-PAGE显示其分子质量单位为38.4 ku,且其表达蛋白以包含体形式存在。Western blot显示rOmp2a能被布鲁氏菌感染患者血清识别,而不与细粒棘球绦虫和单纯疱疹病毒感染者血清反应。结论大肠埃希菌原核表达系统可高效表达不可溶的rOmp2a蛋白,该蛋白具有反应原性,对布鲁氏菌感染患者具有潜在的诊断价值。 

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
材料与方法
    1 材料
        1.1主要试剂
        1.2细菌及载体质粒
    2方法
        2.1 Omp2a表达系统的构建
        2.2表达质粒的克隆与鉴定
        2.3重组蛋白的表达和纯化
        2.4表达蛋白的免疫反应性检测
结 果
    1 目的基因的构建
    2 目的基因的克隆表达
    3 重组Omp2a蛋白的表达及鉴定
    4 重组Omp2a的反应原性鉴定
    5 重组Omp2a的交叉反应原性鉴定
讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合霍乱毒素B亚单位疫苗的构建表达及免疫原性研究[J]. 齐文静,何黎,王甜,郑雪婷,郭宝平,张文宝,况玲,李军.  中国人兽共患病学报. 2019(07)
[2]布鲁氏菌OMP25与OMP31蛋白的表达及其间接ELISA诊断试剂盒研制[J]. 王海丽,董炳梅,李芬,许崇友,王金良.  中国人兽共患病学报. 2019(05)
[3]布鲁氏菌重要膜蛋白研究进展[J]. 刘志国,王妙,崔步云,李振军.  中国人兽共患病学报. 2019(05)
[4]非疫区布鲁氏菌病的早期诊断与防治[J]. 武爱荣,晋兴,黄波,曹义战.  检验医学与临床. 2018(16)
[5]骨关节型布鲁氏菌病32例分析[J]. 李瑞,房丽华.  中国医师杂志. 2017 (01)
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[8]IS711和omp2作为布氏杆菌种属及种株间分子鉴别诊断标记的研究[J]. 陈伟业,胡森,黄克和,步志高.  中国预防兽医学报. 2006(06)
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硕士论文
[1]布鲁氏菌膜蛋白组学研究及免疫蛋白的筛选鉴定[D]. 唐婕.中国人民解放军军事医学科学院 2010
[2]布鲁氏菌部分外膜蛋白基因的克隆、表达及免疫原性研究[D]. 陈瑶.第一军医大学 2006



本文编号：3692928