JAK2/STAT3信号通路在DCP-IhC-ProDer f1嵌合肽疫苗特异性免疫治疗中作用的探讨
发布时间：2022-10-31 20:10
目的:构建编码DCP-IhC-ProDer f1嵌合基因的原核表达载体pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1并进行大规模诱导表达和纯化,用JAK 2抑制剂AG-490阻断JAK2/STAT3信号通路,探讨用重组蛋白DCP-IhC-ProDer f1免疫治疗过敏性哮喘小鼠时对JAK2/STAT3信号通路的影响。方法:1、合成特异性DC细胞分子结合肽peptides 3（FYPSYHSTPQRP）、MHCⅡ伴随分子Ii的第1-110序列的基因片段以及粉尘螨Ⅰ类变应原ProDer f1中的前肽序列,采用分子生物学技术将该三种基因片段连接形成DCP-IhC-ProDer f1基因片段,并将该基因片段插入到大肠杆菌表达载体pET28a（+）中,形成原核表达重组载体pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1,最后通过限制性内切酶双酶切和基因测序的方法对其进行验证;2、将构建好的重组载体pET28a（+）-DCP-IhC-ProDer f1转入到大肠杆菌表达菌株E.coli BL21（DE3）中,先用小剂量诱导剂IPTG对重组基因进行诱导表达,探索出最佳表达条件后进行大规...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 DCP-Ihc-ProDer f1 嵌合肽疫苗原核表达载体的构建和表达
1 研究目的
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.2 方法
3 结果
3.1 重组载体pET28a(+)-DCP的鉴定
3.2 重组质粒pET28a(+)-IhC的双酶切及测序鉴定
3.3 重组质粒pET28a(+)-ProDer f1的双酶切及测序鉴定
3.4 重组质粒pET28a(+)-DCP-IhC-ProDer f1的双酶切鉴定及测序结果
3.5 重组蛋白DCP-IhC-ProDer f1的SDS-PAGE分析
3.6 DCP-IhC-ProDer f1蛋白的纯化
3.7 纯化的DCP-IhC-ProDer f1蛋白浓度测定
4 讨论
第二部分 JAK2/STAT3信号通路在DCP-IhC-ProDer f1 嵌合肽疫苗特异性免疫治疗中作用的探讨
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.2 方法
3 结果
3.1 小鼠症状与体征
3.2 血清中特异性抗体Ig G_(2a)和IgE的含量的变化
3.3 各组肺泡灌洗液中细胞因子的变化
3.4 肺组织病理观察
3.5 肺组织中p-JAK2、p-STAT3蛋白的情况
4 讨论
结论
参考文献
综述 尘螨重组变应原疫苗的研究进展
参考文献
附录
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2800例变态反应性皮肤病患者过敏原检测结果分析[J]. 王卫亮,陈燕,林菊珍,吕冠标,黄远佐,刘奉彬. 黑龙江医学. 2015(09)
[2]粉尘螨1类变应原重组融合表位免疫治疗小鼠哮喘的效果分析[J]. 徐海丰,祝海滨,徐朋飞,李朝品,王克霞. 中国血吸虫病防治杂志. 2015(01)
[3]中国10城市儿童哮喘及其他过敏性疾病现状调查[J]. 张寅平,李百战,黄晨,杨旭,钱华,邓启红,赵卓慧,李安桂,赵加宁,张昕,屈芳,胡宇,阳琴,王娟,张铭,王芳,郑晓红,路婵,刘志坚,孙越霞,莫金汉,赵宜丽,刘炜,王婷婷,NORBCK Dan,BORNEHAG Carl-Gustaf,SUNDELL Jan. 科学通报. 2013(25)
[4]过敏性哮喘屋尘螨变应原集群免疫治疗与常规免疫治疗的对照研究[J]. 雍磊,程相铎,李华信,王公平,张鹏,董学文,贾丹. 免疫学杂志. 2013(09)
[5]特异性脱敏治疗对变应性鼻炎血中Th1/Th2细胞比例调节的影响[J]. 肖才文,李汉琳,李慧,程志英,秦静,周卫,何庆文,徐翔. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2010(20)
[6]变应原疫苗的标准化[J]. 白彩明,汤承祁,裴潇竹,姜敏. 现代生物医学进展. 2010(19)
[7]支气管哮喘免疫学发病机制的研究进展[J]. 上官文姬,沈惠风. 上海交通大学学报(医学版). 2009(05)
[8]尘螨主要重组变应原的研究现状[J]. 张豪,郑小英,詹希美. 国际医学寄生虫病杂志. 2006(04)
[9]变应性哮喘的免疫治疗[J]. 金美玲,蔡映云. 中国临床医生. 2002(02)
[10]变应性鼻炎集群免疫治疗的疗效和安全性临床分析[J]. 张罗,王成硕,王向东,赵岩,刘健慧,张伟,周兵,韩德民. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2008 (03)
硕士论文
[1]经MHC-Ⅱ通路屋尘螨Ⅰ类变应原ProDer p1 T细胞表位嵌合肽的免疫治疗效果分析[D]. 赵蓓蓓.皖南医学院 2015
[2]经MHC-Ⅱ通路的粉尘螨Ⅰ类变应原ProDer f 1疫苗设计及其免疫治疗效果评价[D]. 刘志明.皖南医学院 2014
[3]变应性鼻炎冲击免疫治疗的安全性及有效性研究[D]. 卢川.南方医科大学 2013
本文编号：3699642
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 DCP-Ihc-ProDer f1 嵌合肽疫苗原核表达载体的构建和表达
1 研究目的
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.2 方法
3 结果
3.1 重组载体pET28a(+)-DCP的鉴定
3.2 重组质粒pET28a(+)-IhC的双酶切及测序鉴定
3.3 重组质粒pET28a(+)-ProDer f1的双酶切及测序鉴定
3.4 重组质粒pET28a(+)-DCP-IhC-ProDer f1的双酶切鉴定及测序结果
3.5 重组蛋白DCP-IhC-ProDer f1的SDS-PAGE分析
3.6 DCP-IhC-ProDer f1蛋白的纯化
3.7 纯化的DCP-IhC-ProDer f1蛋白浓度测定
4 讨论
第二部分 JAK2/STAT3信号通路在DCP-IhC-ProDer f1 嵌合肽疫苗特异性免疫治疗中作用的探讨
1 研究目的
2 材料和方法
2.1 实验材料
2.2 方法
3 结果
3.1 小鼠症状与体征
3.2 血清中特异性抗体Ig G_(2a)和IgE的含量的变化
3.3 各组肺泡灌洗液中细胞因子的变化
3.4 肺组织病理观察
3.5 肺组织中p-JAK2、p-STAT3蛋白的情况
4 讨论
结论
参考文献
综述 尘螨重组变应原疫苗的研究进展
参考文献
附录
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]2800例变态反应性皮肤病患者过敏原检测结果分析[J]. 王卫亮,陈燕,林菊珍,吕冠标,黄远佐,刘奉彬. 黑龙江医学. 2015(09)
[2]粉尘螨1类变应原重组融合表位免疫治疗小鼠哮喘的效果分析[J]. 徐海丰,祝海滨,徐朋飞,李朝品,王克霞. 中国血吸虫病防治杂志. 2015(01)
[3]中国10城市儿童哮喘及其他过敏性疾病现状调查[J]. 张寅平,李百战,黄晨,杨旭,钱华,邓启红,赵卓慧,李安桂,赵加宁,张昕,屈芳,胡宇,阳琴,王娟,张铭,王芳,郑晓红,路婵,刘志坚,孙越霞,莫金汉,赵宜丽,刘炜,王婷婷,NORBCK Dan,BORNEHAG Carl-Gustaf,SUNDELL Jan. 科学通报. 2013(25)
[4]过敏性哮喘屋尘螨变应原集群免疫治疗与常规免疫治疗的对照研究[J]. 雍磊,程相铎,李华信,王公平,张鹏,董学文,贾丹. 免疫学杂志. 2013(09)
[5]特异性脱敏治疗对变应性鼻炎血中Th1/Th2细胞比例调节的影响[J]. 肖才文,李汉琳,李慧,程志英,秦静,周卫,何庆文,徐翔. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2010(20)
[6]变应原疫苗的标准化[J]. 白彩明,汤承祁,裴潇竹,姜敏. 现代生物医学进展. 2010(19)
[7]支气管哮喘免疫学发病机制的研究进展[J]. 上官文姬,沈惠风. 上海交通大学学报(医学版). 2009(05)
[8]尘螨主要重组变应原的研究现状[J]. 张豪,郑小英,詹希美. 国际医学寄生虫病杂志. 2006(04)
[9]变应性哮喘的免疫治疗[J]. 金美玲,蔡映云. 中国临床医生. 2002(02)
[10]变应性鼻炎集群免疫治疗的疗效和安全性临床分析[J]. 张罗,王成硕,王向东,赵岩,刘健慧,张伟,周兵,韩德民. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2008 (03)
硕士论文
[1]经MHC-Ⅱ通路屋尘螨Ⅰ类变应原ProDer p1 T细胞表位嵌合肽的免疫治疗效果分析[D]. 赵蓓蓓.皖南医学院 2015
[2]经MHC-Ⅱ通路的粉尘螨Ⅰ类变应原ProDer f 1疫苗设计及其免疫治疗效果评价[D]. 刘志明.皖南医学院 2014
[3]变应性鼻炎冲击免疫治疗的安全性及有效性研究[D]. 卢川.南方医科大学 2013
本文编号：3699642
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