LncRNA Oeblr20通过Oct4 eRNA通路调控干细胞多能性和重编程的作用及机制研究
发布时间：2023-01-27 17:41
研究背景:多能性干细胞（pluripotent stem cells,PSCs）因其无限的自我更新及向三个胚层分化的多能性,在发育生物学及再生医学中拥有巨大的应用潜能。PSCs包括由哺乳动物囊胚中的内细胞团分离而来的胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）及由体细胞过表达Oct4 Sox2,Klf-4,c-Myc（OSKM）四种转录因子重编程而产生的诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）。其中iPSCs来源于自体体细胞,回避了 ESCs应用时的伦理争议,且避免了异体移植产生的免疫排异,因此应用前景更广。然而,目前的重编程体系存在效率低、耗时长的瓶颈,阻碍了 iPSCs在再生医学中的应用。近期的研究发现长链非编码RNA（lnon-coding RNA,lncRNA）在重编程及多能性的维持上可能具有重要的调控作用。lncRNAs的长度一般超过200个核苷酸,此类RNAs虽然不编码蛋白质,但以其独特的方式在多种层面上调控基因的表达,包括转录层面、转录后层面及蛋白质层面等等。通常,物种越复杂,lncRNAs的种类越繁多...
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
abstract
中英文缩略词对照表
第1章 绪论
1.1 iPSCs的应用现状
1.1.1 iPSCs的应用前景
1.1.2 iPSCs的应用瓶颈
1.2 体细胞重编程的分子机制
1.2.1 重编程进程
1.2.2 表观遗传学调控机制
1.3 提高重编程效率的研究进展
1.3.1 添加高通量小分子
1.3.2 改变诱导体系及环境
1.3.3 寻找新的调控因子
1.4 长链非编码RNA
1.4.1 lncRNA的分类
1.4.2 lncRNA的作用机制
1.4.3 lncRNA对重编程的调控
1.5 增强子RNA
1.5.1 eRNAs的特点
1.5.2 eRNAs的作用机制
1.5.3 eRNAs对重编程的影响
1.6 立项依据——lncRNA Oeblr20的作用及机制研究
第2章 研究路线
2.1 特点及全长分析
2.2 功能研究
2.3 机制探索
第3章 实验材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 实验用细胞
3.1.2 质粒
3.1.3 细胞培养所需试剂及配方
3.1.4 分子生物学实验所需试剂及配方
3.1.5 实验所需仪器
3.1.6 实验所需耗材
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 RNA提取及cDNA合成
3.2.3 拟胚体分化实验
3.2.4 实时定量 PCR (Real-time PCR)
3.2.5 Oeblr20全长序列分析
3.2.6 构建质粒
3.2.7 慢病毒包装及感染
3.2.8 重编程试验
3.2.9 免疫荧光染色
3.2.10 RAN逆转录相关捕获技术
3.2.11 RNA-DNA FISH
3.2.12 Luciferase双荧光素酶报告系统
3.2.13 DNA提取
3.2.14 甲基化水平测定
3.2.15 染色质免疫共沉淀技术
3.2.16 RNA结合蛋白免疫沉淀技术
3.3 实验所需引物信息
3.4 统计学分析
第4章 实验结果及分析
4.1 多能性lncRNA Oeblr20的发现及鉴定
4.1.1 RNA-Seq
4.1.2 RAT-Seq
4.2 Oeblr20特点及全长分析
4.2.1 Oeblr20在细胞及组织中的差异性表达
4.2.2 拟胚体分化实验
4.2.3 亚细胞定位
4.2.4 Oeblr20全长序列信息
4.3 Oeblr20的功能研究
4.3.1 Oeblr20维持干细胞多能性
4.3.2 促进多能性基因表达——过表达实验
4.3.3 提高iPSCs诱导效率及多能性——重编程试验
4.4 Oeblr20的机制探索
4.4.1 Oct4增强子为Oeblr20的作用靶点
4.4.2 Oeblr20表观遗传学调控Oct4增强子RNA表达
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3732401
【文章页数】：105 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
前言
中文摘要
abstract
中英文缩略词对照表
第1章 绪论
1.1 iPSCs的应用现状
1.1.1 iPSCs的应用前景
1.1.2 iPSCs的应用瓶颈
1.2 体细胞重编程的分子机制
1.2.1 重编程进程
1.2.2 表观遗传学调控机制
1.3 提高重编程效率的研究进展
1.3.1 添加高通量小分子
1.3.2 改变诱导体系及环境
1.3.3 寻找新的调控因子
1.4 长链非编码RNA
1.4.1 lncRNA的分类
1.4.2 lncRNA的作用机制
1.4.3 lncRNA对重编程的调控
1.5 增强子RNA
1.5.1 eRNAs的特点
1.5.2 eRNAs的作用机制
1.5.3 eRNAs对重编程的影响
1.6 立项依据——lncRNA Oeblr20的作用及机制研究
第2章 研究路线
2.1 特点及全长分析
2.2 功能研究
2.3 机制探索
第3章 实验材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 实验用细胞
3.1.2 质粒
3.1.3 细胞培养所需试剂及配方
3.1.4 分子生物学实验所需试剂及配方
3.1.5 实验所需仪器
3.1.6 实验所需耗材
3.2 实验方法
3.2.1 细胞培养
3.2.2 RNA提取及cDNA合成
3.2.3 拟胚体分化实验
3.2.4 实时定量 PCR (Real-time PCR)
3.2.5 Oeblr20全长序列分析
3.2.6 构建质粒
3.2.7 慢病毒包装及感染
3.2.8 重编程试验
3.2.9 免疫荧光染色
3.2.10 RAN逆转录相关捕获技术
3.2.11 RNA-DNA FISH
3.2.12 Luciferase双荧光素酶报告系统
3.2.13 DNA提取
3.2.14 甲基化水平测定
3.2.15 染色质免疫共沉淀技术
3.2.16 RNA结合蛋白免疫沉淀技术
3.3 实验所需引物信息
3.4 统计学分析
第4章 实验结果及分析
4.1 多能性lncRNA Oeblr20的发现及鉴定
4.1.1 RNA-Seq
4.1.2 RAT-Seq
4.2 Oeblr20特点及全长分析
4.2.1 Oeblr20在细胞及组织中的差异性表达
4.2.2 拟胚体分化实验
4.2.3 亚细胞定位
4.2.4 Oeblr20全长序列信息
4.3 Oeblr20的功能研究
4.3.1 Oeblr20维持干细胞多能性
4.3.2 促进多能性基因表达——过表达实验
4.3.3 提高iPSCs诱导效率及多能性——重编程试验
4.4 Oeblr20的机制探索
4.4.1 Oct4增强子为Oeblr20的作用靶点
4.4.2 Oeblr20表观遗传学调控Oct4增强子RNA表达
第5章 讨论
第6章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3732401
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