二至丸治疗斑马鱼骨质疏松模型效益观察及破骨细胞自噬机制

发布时间：2023-04-02 09:11

　　目的观察二至丸对泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型的治疗疗效,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制。方法选取正常培养3 d后活力较好的斑马鱼幼鱼,用25μmol/L泼尼松龙建立斑马鱼骨质疏松症模型,造模2 d后分组,分为空白组、模型组、依替磷酸二钠(ED)组(300 mg/L)、墨旱莲组(50μg/mL)、女贞子组(50μg/mL)和二至丸组(100μg/mL)。4 d后,用0.2%钙黄绿素进行染色,拍照并统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR检测斑马鱼成骨分化基因碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白2b(Bmp-2b)、Runt相关转录因子2(Runx2)和破骨分化基因组织蛋白酶K(CTSK)、活化T细胞核因子(NFATC-1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的表达。培养RAW264.7细胞至80%～90%密度后分为空白组、LPS诱导组(10μg/L)、二至丸诱导组(100μg/mL)、墨旱莲诱导组(50μg/mL)和女贞子诱导组(50μg/mL)。经LPS诱导细胞破骨分化及药物干预4 d后,实时荧光定量PCR检测RAW264.7细胞TRAP、CTSK、NFATC-1和自噬相关基...

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【文章目录】：
1 材料及方法
    1.1 材料
        1.1.1 药物与试剂
        1.1.2 实验动物及细胞
        1.1.3 实验仪器
    1.2 方法
        1.2.1 斑马鱼药物浓度筛选
        1.2.2 斑马鱼骨质疏松模型治疗效果评价
        1.2.3 MTT比色法检测RAW264.7细胞活力
        1.2.4 qPCR检测各基因表达
        1.2.5 数据处理与分析
2 结果
    2.1 药物安全性评价
    2.2 二至丸抗骨质疏松活性评价
    2.3 二至丸方对成骨及破骨相关基因表达的影响
    2.4 二至丸对RAW264.7细胞增殖的影响
    2.5 二至丸对RAW264.7破骨分化的影响
    2.6 二至丸对RAW264.7破骨分化标志基因表达的影响
    2.7 二至丸对自噬相关基因表达的影响
3 讨论



本文编号：3778960