汉滩病毒HTNV Gn-CT利用宿主ESCRT介导病毒出芽机制的研究

发布时间：2023-04-03 01:23

　　【背景】汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)属于布尼亚病毒目汉坦病毒科正汉坦病毒属,为基因组分节段的单负链RNA病毒,目前其感染和致病机制尚不完全清楚,尤其是子代病毒释放的过程。成熟且具有感染力的病毒颗粒在细胞内组装后,需要通过出芽的方式释放到细胞外,进一步感染其它细胞,从而扩大感染。多数负链RNA病毒依靠其基质蛋白(matrix protein)提供的活性出芽,并通过其中的一些特定的保守结构域牢固结合宿主内吞体分选转运复合体(Endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)来完成出芽小泡的形成和剪切分离,由于这些结构域在病毒复制周期的晚期起作用,故称其为晚期结构域(late domain)。布尼亚病毒不具有基质蛋白,但糖蛋白单独表达可形成病毒样颗粒(virus like particle,VLP),表明糖蛋白具有类似基质蛋白的功能。在对不同汉坦病毒糖蛋白HTNV Gn-CT氨基酸序列进行比对后发现,其中均含有一段保守的氨基酸序列Y-R-T-L,与经典的晚期结构域Y-P-x-L较为相似,故我们欲研究该序列在HTN...

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献回顾
第一部分 HTNVGN-CTY-R-T-L序列对VLP释放的影响
    1 材料
        1.1 菌种、载体
        1.2 细胞
        1.3 试剂
        1.4 培养液(基)与缓冲液
        1.5 仪器与器材
    2 方法
        2.1 HTNVGn-CT突变载体的构建
        2.2 HTNVGn-CT突变对VLP释放的影响
    3 结果
        3.1 成功构建了HTNVGn-CTY-R-T-L序列的突变载体
        3.2 HTNVGn-CT中Y-R-T-L序列突变影响VLP的释放
    4 讨论
第二部分 明确参与HTNV出芽相关宿主ESCRT分子
    1 材料
        1.1 病毒
        1.2 细胞
        1.3 抗体
        1.4 其它试剂
        1.5 培养液(基)与缓冲液
        1.6 仪器与器材
    2 方法
        2.1 ESCRT关键分子ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4AsiRNA的设计筛选及验证
        2.2 ESCRT关键分子表达降低对HTNV出芽的影响
    3 结果
        3.1 构建的siRNA能有效抑制ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表达
        3.2 ALIX、TSG101、Nedd4及Vps4A表达降低后可抑制HTNV出芽
    4 讨论
第三部分 明确HTNVGN-CT与宿主ESCRT相互作用介导病毒出芽的机制
    1 材料
        1.1 病毒
        1.2 细胞
        1.3 抗体
        1.4 其它试剂
        1.5 培养液(基)与缓冲液
        1.6 仪器与器材
    2 方法
        2.1 筛选与HTNV包膜糖蛋白相互作用的分子
        2.2 明确ALIX与HTNVGn相互作用的位置
        2.3 检测ALIX过表达对HTNV出芽的影响
    3 结果
        3.1 Co-IP检测HTNVGn-CT与ALIX、Vps4A、Nedd4及TSG101的相互作用
        3.2 检测HTNVGn-CT与ALIX相互作用位点
        3.3 检测ALIX过表达对HTNVGn-CT相互作用的影响
        3.4 检测ALIX过表达对HTNV出芽及HTNVVLP释放的影响
    4 讨论
小结
参考文献
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3780363