人胃内因子在谷氨酸棒杆菌中的表达及活性研究

发布时间：2023-04-26 23:00

　　人胃内因子(GIF)在人体内具有重要的作用,主要协助VB12在小肠中的吸收,缺失将导致机体恶性贫血,同时会降低免疫力。谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)作为一种不产内毒素的食品级安全微生物,在药用蛋白的表达上具有巨大的优势。为了在C.glutamicum中进行药用蛋白GIF的表达,编码GIF的重组基因rgif被合成,且进行密码子优化以保证GIF的正常翻译。重组基因rgif成功克隆到表达载体pXMJ19上,并导入C.glutamicum成功进行GIF的表达。为了提高GIF的表达效果,采用正交试验设计对GIF的发酵条件进行优化。发现GIF在C.glutamicum中的最佳发酵条件组合为:IPTG浓度100μmol/L、诱导时机10 h、发酵时长22 h、发酵温度23℃,在该条件下GIF得到可溶性表达,且可以通过His标签被HisTrap FF柱纯化。在谷氨酸棒杆菌中表达的GIF可以通过ELISA试剂盒检测到免疫活性,且定量产量达到42.3 mg/L。根据正交试验的结果分析发现,GIF的产量随着发酵温度从23℃增加到37℃持续降低,随着诱导时机从0 h延迟到10 h持续增加,随着发酵时...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株与质粒
        1.1.2 主要试剂与仪器
        1.1.3 培养基
    1.2 方法
        1.2.1 基因合成
        1.2.2 表达载体pXMJ19-rgif的构建
        1.2.3 C.glutamicum/pXMJ19-rgif的构建
        1.2.4 C.glutamicum/pXMJ19-rgif和C.glutamicum/pXMJ19的诱导表达
        1.2.5 C.glutamicum/pXMJ19-rgif的发酵条件优化
        1.2.6 WB结果灰度分析
        1.2.7 GIF蛋白纯化及定量
        1.2.8 GIF活性分析
2 结果
    2.1 pXMJ19-rgif的构建
    2.2 表达菌株C.glutamicum/pXMJ19-rgif的构建
    2.3 C.glutamicum/pXMJ19-rgif和C.glutamicum/pXMJ19的诱导表达
    2.4 正交试验优化C.glutamicum/pXMJ19-rgif发酵产GIF
    2.5 GIF发酵表达及纯化定量
    2.6 GIF活性分析
3 讨论



本文编号：3802359