结核分枝杆菌潜伏期抗原Rv3044的原核表达及其免疫原性

发布时间：2023-04-27 05:41

　　目的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tb)潜伏期特异抗原Rv3044,并检测其能否被结核(tuberculosis,TB)感染者外周血T细胞识别,及其在小鼠模型中的免疫原性。方法以分子克隆技术构建质粒pET28aRv3044,IPTG诱导表达、亲和层析纯化r Rv3044蛋白,Western blot法进行鉴定;全血IFNγ分析试验(whole blood IFNγanalysis test,WBIA)检测其是否被TB感染者识别;联合融合佐剂DMT免疫C57BL/6小鼠,检测特异性CD4+Th1型应答和体液免疫应答水平。结果构建的重组表达质粒p ET28a-Rv3044经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达及纯化的rRv3044蛋白相对分子质量均为38 600。r Rv3044刺激的TB感染者,尤其TB潜伏感染(latent TB infection,LTBI)者,外周血T细胞分泌的IFNγ水平均显著高于健康对照者(P <0. 05);BCG+rRv044/DMT组诱导小鼠产生显著高水平的IgG抗体及其亚类,趋向于Th1型免疫应答,同时...

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒株、菌株及载体
    1.2 主要试剂及仪器
    1.3 实验动物
    1.4 实验动物分组及免疫
    1.5 重组质粒的构建
    1.6 重组蛋白的表达及纯化
    1.7 纯化产物的鉴定
    1.8 受试者分组及人群外周血抗原特异性IFNγ浓度的WBIA检测
    1.9 小鼠血清抗原特异性抗体水平的检测
    1.1 0 脾细胞培养上清中抗原特异性Th1型细胞因子水平的检测
    1.1 1 统计学分析
2 结果
    2.1 重组表达质粒pET28a-Rv3044的鉴定
    2.2 rRv3044蛋白的鉴定
    2.3 人群外周血中抗原特异性IFNγ水平
    2.4小鼠血清中抗原特异性IgG抗体水平
    2.5 小鼠脾细胞特异性Th1型细胞因子水平
3 讨论



本文编号：3802981