伯氏疟原虫静息巯基氧化酶的生物信息学分析和体外酶活检测

发布时间：2023-11-08 18:24

　　目的克隆、表达伯氏疟原虫静息巯基氧化酶(PbQSOX)基因,纯化重组Pb QSOX蛋白(rPbQSOX),并对其生物信息学特点和酶活性进行分析。方法分别采用BLAST、 SMART、 ClustalW对P QSOX蛋白的信号肽、蛋白结构域、活性位点、同源性进行分析;通过BLAST和MAGA5构建PbQSOX的系统进化树;应用SWISS-MODEL对PbQSOX蛋白的三级结构进行预测。BALB/c雌性小鼠经腹腔感染伯氏疟原虫(1×107/鼠),于感染后第4天提取疟原虫基因组DNA。PCR扩增PbQSOX基因,经测序正确后,将目的片段连接至原核表达载体pET30a(+),构建重组质粒pET30a(+)-PbQSOX。将鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,取菌液进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析;应用镍氨三乙酸琼脂糖柱纯化可溶性的rPbQSOX,并以三(2-羧乙基)膦(TCEP)或二硫苏糖醇(DTT)为酶反应底物分析rPbQSOX的酶活性。P QSOX大...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒、菌株、疟原虫虫株及实验动物来源
    1.2 主要试剂
    1.3 Pb QSOX蛋白的生物信息学分析
    1.4 疟原虫基因组DNA的提取
    1.5 Pb QSOX基因的扩增
    1.6 pET30a(+)-Pb QSOX重组质粒的构建
    1.7 r Pb QSOX蛋白的表达与纯化
    1.8 r Pb QSOX的蛋白质免疫印迹（Western blotting）分析
    1.9 r Pb QSOX酶活性分析
    1.1 0 伦理批准和患者知情同意
    1.1 1 统计学分析
2 结果
    2.1 Pb QSOX的生物信息学分析
    2.2 pET30a(+)-Pb QSOX的构建、原核表达和鉴定
    2.3 r Pb QSOX酶活性测定
3 讨论



本文编号：3861501