MIF和D-DT双基因敲减对黑色素瘤B16细胞及其小鼠荷瘤模型的抑制作用及其机制研究

发布时间：2024-02-04 06:19

　　研究背景和目的:黑色素瘤,又称恶性黑色素瘤,是一种常见且恶性程度很高的皮肤肿瘤。由于临床上尚缺乏有效的药物或治疗方法,因此开发新的靶向药物已成为热点。巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种多功能细胞因子,在炎症和免疫反应中发挥关键作用。临床研究发现,MIF在许多癌症的多个阶段都高表达,提示其与肿瘤的发生发展密切相关。然而,针对MIF为靶标的新药研发却不是很理想。CD74是MIF的胞膜受体,但有研究发现,抑制CD74产生的抑癌效果明显强于单基因敲减MIF,提示CD74可能存在第二配体。D-多巴色素互变异构酶(D-DT)为MIF的唯一同系物,这也提示MIF和D-DT两者之间在功能上可能存在相互协同关系。我们的预实验发现,在黑色素瘤细胞B16中,D-DT和MIF均呈高表达。本课题将利用单基因或双基因敲减MIF和D-DT基因的黑色素瘤细胞B16细胞及荷瘤小鼠模型,观察它们对肿瘤增殖抑制程度的影响,以推测是否存在协同作用,并试图阐明其可能的分子机制,从而为临床上寻找有效治疗黑色素瘤的分子靶点提供实验依据。实验方法:1.构建MIF和D-DT单基因或双基因敲减的黑色素瘤B16稳定细胞系:将分别含有B1...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3.1五种不同肿瘤细胞中MIF和D-DT的表达

且在B16细胞中皆高表达，而在4T1细胞中D-DT表达相对较少（图3.1A）。MIF和D-DT属于同一个蛋白家族，且都位于同一个染色体上。在人类D-DT和MIF的mRNA中它们有50％的同源性，在蛋白水平上有34%的同源性。在小鼠中，D-DT和....

图3.2shRNA慢病毒液对B16细胞中MIF和D-DT的敲减效果检测

第3章实验结果高，再选择这两条shRNA病毒液构建B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-DT四种细胞系，即对照组、MIF单敲组、D-DT单敲组、MIF/D-DT双敲组。通过Weste....

图3.3MIF和D-DT双基因敲减对B16荷瘤鼠的肿瘤生长影响

22图3.3MIF和D-DT双基因敲减对B16荷瘤鼠的肿瘤生长影响。A图为C57BL/6雌鼠（n=6）分别接种3×104个B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-DT四种细胞，....

图3.5双基因敲减MIF和DDT对B16细胞的增殖活性和克隆形成集落能力的影响

3.5双基因敲减MIF和DDT对B16细胞的增殖活性和克隆形成集落能力的影响。A图CCK8检测B16shRNA-CONT、B16shRNA-MIF、B16shRNA-D-DT、B16shRNA-MIF/D-四种细胞系在24h，48h，72h三个时....

本文编号：3895358