钙调蛋白及其突变体与电压门控钠离子通道1.2异亮氨酸-谷氨酰胺基序的结合作用

发布时间：2024-02-24 13:52

　　目的:探讨在不同钙离子浓度下电压门控钠离子通道(Na_V)1.2与钙调蛋白(CaM)的结合,并分析CaM的钙离子结合位点突变后与Na_V1.2结合能力的变化。方法:应用PCR技术构建Na_V1.2蛋白片段异亮氨酸-谷胺酰胺(IQ)基序的cDNA,采用QIAGEN点突变技术构建CaM突变体(CaM₁₂、CaM₃₄、CaM₁₂₃₄),应用牵出(pull-down)试验技术检测有钙(100 nmol/L钙离子浓度)和无钙条件下Na_V1.2 IQ与CaM及其突变体(CaM₁₂、CaM₃₄、CaM₁₂₃₄)的结合情况。结果:CaM与Na_V1.2 IQ在无钙和有钙情况下均可互相结合,而单独重组谷胱甘肽-S-转移酶(GST)不具有与CaM结合的能力。无钙条件下CaM与Na_V1.2 IQ的结合量大于有钙条件下两者的结合量(P<0.05);无钙...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材 料
    1.2 cDNA构建和基因突变
    1.3 重组谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白的表达和纯化
    1.4 牵出(pull-down)试验检测CaM与GST-IQ结合量
    1.5 统计学方法
2 结 果
    2.1 CaM与NaV1.2 IQ的结合能力
    2.2 钙离子浓度对CaM与NaV1.2 IQ结合的影响
    2.3 CaM突变体与NaV1.2 IQ的结合能力
3 讨 论



本文编号：3909096