曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体的制备及初步应用

发布时间：2024-03-10 04:46

　　目的:制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,并基于获得的抗体建立用于快速准确检测曲霉菌感染的双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA),以期可用于侵袭性曲霉菌病的临床诊断。方法:提取曲霉菌半乳甘露聚糖后免疫BALB/c小鼠,筛选与制备抗曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体,通过间接ELISA法与Western Blot方法开展单克隆抗体检测性能分析,使用获得的单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,并初步应用于曲霉菌感染血清检测。结果:获得抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体5株,均可特异性识别曲霉菌半乳甘露聚糖,以其中性能最佳的3C9抗体和辣根过氧化物酶标记的3C9抗体配对为基础,建立了双抗体夹心ELISA方法,通过初步评价确定该方法可应用于临床侵袭性曲霉菌病血清检测,并且该方法与现有商品化试剂盒相比检测背景值较低,可更有效区分曲霉菌感染阴阳性血清。结论:本研究筛选获得针对曲霉菌半乳甘露聚糖的特异性单克隆抗体,以该抗体为基础建立双抗体夹心ELISA方法具有潜在转化应用前景,可为侵袭性曲霉菌病的临床诊断提供支持。

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【部分图文】：

图1抗GM单克隆抗体评价

本研究提取曲霉菌GM作为抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术和间接ELISA法筛选获得5株可分泌针对曲霉菌GM的单克隆抗体。ELISA检测结果如图1A所示，所有单抗对阴性对照（生理盐水）无反应，但与提取的GM都有较好的特异性反应，且抗体效价达105到106。使用小鼠单克隆抗体....

图2基于抗GM单克隆抗体建立针对曲霉菌的ELISA检测方法

侵袭性曲霉菌病诊断的"金标准"是组织标本内的病原菌培养或组织病理学，但是由于病人通常是免疫受损且伴有各类血细胞减少，组织活检可能存在风险，因此该项检查在临床上通常不能及时实施或者不能对该病做出及时识别。近年来研究发现，病人血清内曲霉菌GM抗原含量的检测对侵袭性曲霉菌病的早期诊断具....

图3建立的GM-ELISA方法可区分曲霉菌临床阳性和阴性血清

图2基于抗GM单克隆抗体建立针对曲霉菌的ELISA检测方法本研究尝试基于曲霉菌细胞壁GM单克隆筛选与ELISA方法，建立高灵敏度、高特异性的曲霉菌GM的检测试剂。首先,本研究制备了曲霉菌GM的单克隆抗体，筛选出5株抗曲霉菌GM的单抗并且进行配对，结果获得具有较好反应性与特异性的....

本文编号：3924267