Sel1L分子调控骨髓源树突状细胞的表型、功能以及自噬
发布时间：2024-03-10 03:31
目的:树突状细胞是重要的抗原提呈细胞,通过处理和提呈抗原,从而启动T细胞反应,在固有免疫和适应性免疫中发挥关键作用。在树突状细胞发挥作用的过程中,其内质网(Endoplasmic reticulum,ER)中需要大量新蛋白质的合成。Sel1L分子参与组成的ER相关降解复合体(Endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD)对胞内非正常折叠蛋白的快速清除,是保证这些新合成蛋白质正常折叠的重要机制,并可能参与对树突状细胞表型和功能的调控,以及影响树突状细胞自噬。因此,阐明Sel1L分子对树突状细胞表型、功能以及自噬的调控作用,对正确认识树突状细胞以及免疫应答有重要意义。方法:1.利用Cre-loxP重组酶系统建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型,将CD11c-Cre+/-小鼠与Sel1Lf/f小鼠进行繁育,至F3代时通过聚合酶链式反应(PCR)技术筛选出用于实验的CD11c-Cre-/-Sel1Lf/f与CD11c-Cre+/-S...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写索引
第一章 绪论
1.1 Sel1L分子
1.1.1 Sel1L基本介绍
1.1.2 Sel1L研究进展
1.2 树突状细胞
1.2.1 树突状细胞的发育
1.2.2 树突状细胞的分类
1.2.3 树突状细胞的功能
1.2.4 树突状细胞与相关疾病
1.3 自噬
1.3.1 自噬与内质网应激的关系
1.3.2 自噬的主要途径
1.3.3 与自噬相关的mTOR信号通路
1.3.4 mTOR信号通路与内质网应激的关系
1.4 本实验的研究目的、方法、实验设计及意义
1.4.1 研究目的
1.4.2 研究方法
1.4.3 技术路线
1.4.4 研究意义
第二章 Sel1L分子调控树突状细胞的表型和功能
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 利用Cre-loxP系统建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
2.2.2 利用PCR进行小鼠基因鉴定
2.2.3 小鼠骨髓细胞的制备及BMDCs的体外培养
2.2.4 BMDCs的 RNA测序
2.2.5 流式细胞术分析BMDCs膜表面共刺激分子和MHC-I、MHC-II类分子的表达
2.2.6 ELISA法检测BMDCs上清中细胞因子的分泌
2.2.7 流式细胞术检测抗原特异性CD4+T细胞体外增殖的能力
2.2.8 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
2.3.2 mRNA功能富集分析
2.3.3 DCs定向敲除Sel1L对小鼠BMDCsCD80、CD86、MHC-I和 MHC-II类分子的影响
2.3.4 DCs定向敲除Sel1L对小鼠BMDCs分泌细胞因子的影响
2.3.5 DCs中 Sel1L缺失抑制BMDCs激活抗原特异性CD4+T细胞的增殖
2.4 讨论
第三章 Sel1L分子调控树突状细胞的自噬
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 主要仪器
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要试剂的配制
3.2 实验方法
3.2.1 BMDCs的 RNA测序
3.2.2 透射电子显微镜(TEM)检测BMDCs中的自噬小体
3.2.3 免疫荧光法检测BMDCs中 LC3 的表达水平
3.2.4 Western Blot技术检测BMDCs中 BiP、LC3和p62 的表达水平
3.3 实验结果
3.3.1 DCs中 Sel1L的缺失激活BMDCs内质网应激
3.3.2 DCs中定向敲除Sel1L后自噬小体增多
3.3.3 DCs中 Sel1L的缺失促进BMDCs表达LC3
3.3.4 DCs中 Sel1L的缺失对LC3和p62 表达的影响
3.4 讨论
第四章 Sel1L分子影响树突状细胞m TOR信号通路
4.1 实验材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要仪器
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要试剂的配制
4.2 实验方法
4.2.1 Western Blot技术检测BMDCs中 mTOR信号通路相关蛋白
4.3 实验结果
4.4 讨论
第五章 主要结论及展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
文献综述
参考文献
致谢
硕士期间发表的文章及参加的会议
本文编号：3924174
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写索引
第一章 绪论
1.1 Sel1L分子
1.1.1 Sel1L基本介绍
1.1.2 Sel1L研究进展
1.2 树突状细胞
1.2.1 树突状细胞的发育
1.2.2 树突状细胞的分类
1.2.3 树突状细胞的功能
1.2.4 树突状细胞与相关疾病
1.3 自噬
1.3.1 自噬与内质网应激的关系
1.3.2 自噬的主要途径
1.3.3 与自噬相关的mTOR信号通路
1.3.4 mTOR信号通路与内质网应激的关系
1.4 本实验的研究目的、方法、实验设计及意义
1.4.1 研究目的
1.4.2 研究方法
1.4.3 技术路线
1.4.4 研究意义
第二章 Sel1L分子调控树突状细胞的表型和功能
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 利用Cre-loxP系统建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
2.2.2 利用PCR进行小鼠基因鉴定
2.2.3 小鼠骨髓细胞的制备及BMDCs的体外培养
2.2.4 BMDCs的 RNA测序
2.2.5 流式细胞术分析BMDCs膜表面共刺激分子和MHC-I、MHC-II类分子的表达
2.2.6 ELISA法检测BMDCs上清中细胞因子的分泌
2.2.7 流式细胞术检测抗原特异性CD4+T细胞体外增殖的能力
2.2.8 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
2.3.2 mRNA功能富集分析
2.3.3 DCs定向敲除Sel1L对小鼠BMDCsCD80、CD86、MHC-I和 MHC-II类分子的影响
2.3.4 DCs定向敲除Sel1L对小鼠BMDCs分泌细胞因子的影响
2.3.5 DCs中 Sel1L缺失抑制BMDCs激活抗原特异性CD4+T细胞的增殖
2.4 讨论
第三章 Sel1L分子调控树突状细胞的自噬
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 主要仪器
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要试剂的配制
3.2 实验方法
3.2.1 BMDCs的 RNA测序
3.2.2 透射电子显微镜(TEM)检测BMDCs中的自噬小体
3.2.3 免疫荧光法检测BMDCs中 LC3 的表达水平
3.2.4 Western Blot技术检测BMDCs中 BiP、LC3和p62 的表达水平
3.3 实验结果
3.3.1 DCs中 Sel1L的缺失激活BMDCs内质网应激
3.3.2 DCs中定向敲除Sel1L后自噬小体增多
3.3.3 DCs中 Sel1L的缺失促进BMDCs表达LC3
3.3.4 DCs中 Sel1L的缺失对LC3和p62 表达的影响
3.4 讨论
第四章 Sel1L分子影响树突状细胞m TOR信号通路
4.1 实验材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要仪器
4.1.3 主要试剂
4.1.4 主要试剂的配制
4.2 实验方法
4.2.1 Western Blot技术检测BMDCs中 mTOR信号通路相关蛋白
4.3 实验结果
4.4 讨论
第五章 主要结论及展望
5.1 主要结论
5.2 展望
参考文献
文献综述
参考文献
致谢
硕士期间发表的文章及参加的会议
本文编号：3924174
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