Wnt/β-catenin信号途径抑制Raw264.7分化

发布时间：2024-03-17 07:07

　　目的了解Wnt/β-catenin信号途径对小鼠单核/巨噬细胞Raw264.7的分化调控。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空Raw264.7组)、实验对照组(即感染Ad-GFP组)、阳性对照组(即50 ng/mL RANKL诱导组)和实验组(即感染Ad-β-catenin组)。分别给予上述4组处理因素后常规细胞培养3、6和9 d提取细胞总RNA,荧光定量real-time(RT-PCR)检测核因子受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)及金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达,再于同样处理因素培养6 d通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察Raw264.7的分化情况;Western blot检测TRAP、Cathepsin K蛋白的表达。结果 RT-PCR检测Ad-β-catenin组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达;TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导Raw264.7成多核细胞,空白组和Ad-GFP组有个别多核细胞,Ad-β-catenin组为单核细胞;Wes...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养, 病毒扩增及滴度测定:
        1.2.2 Real-time-PCR检测Raw264.7
        1.2.3 抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色:
        1.2.4 Western blot 检测:
2 结果
    2.1 病毒感染效率及细胞形态
    2.2 RT-PCR检测RANK、TRAP、Cathepsin K和MMP-9 mRNA的表达
    2.3 抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色
    2.4 Western blot检测TRAP和Cathepsin K蛋白的表达
3 讨论



本文编号：3930689