新城疫病毒包膜糖蛋白关键结构域之间连接区域的结构与功能研究

发布时间：2024-03-17 05:46

　　第一部分NDVHN蛋白头-茎部连接区域的结构与功能背景新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是有包膜、不分节段的单股负链RNA病毒,属于副粘病毒科。该病毒科包含许多重要的人和动物致病病毒。腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)、麻疹病毒(measles virus,MeV)、副流感病毒(parainfluenza viruses,PIVs)、犬瘟热病毒(canine distemper virus)、亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)和尼帕病毒(Nipah virus,NiV)等是该病毒科的典型代表病毒。在感染靶细胞时,所有副粘病毒都需要将它们的病毒包膜与其宿主的靶细胞膜融合。在该过程中,大多数副粘病毒通过吸附蛋白和融合蛋白(fusion protein,F)的协同作用诱导膜融合发生。其中吸附蛋白根据其不同的功能和病毒来源可分为3类:血凝素-神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)、血凝素蛋白(hemagglutinin,H)和G蛋白。HN蛋白同时具有受体识别活性和神经氨酸酶活性(neuraminidas...

【文章页数】：164 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２?ＮＤＶ?ＨＮ突变体蛋白ＩＩＦＡ结果将ＢＨＫ－２１细胞铺至２４孔板中，单独转染ＮＤＶ野生??型或突变型ＨＮ质粒，检测所用的第一抗体为两种ＮＤＶＨＮ的单克隆抗体混合物（１：１００），??第二抗体为ＦＩＴＣ标记的山羊抗小鼠ＩｇＧ（ｌ：２００），于荧光显微镜下观察并拍照

?能正常发挥作用，所以在进行表达检测时均未对转染的细胞进行破膜处理。??ＩＩＦＡ观察结果显示（图２），各突变体蛋白均能在细胞膜上被检测到，荧光??显微镜下观察到被绿色荧光标记的细胞。从荧光标记的情况来看，各突变体蛋白??的表达差异不大。缺失突变体也能被检测到。为了对其表达效率进行....

图３?ＨＮ突变体蛋白的细胞表面表达效率的流式检测结果（Ａ）各突变体的代表性荧光直方??图

的表达差异不大。缺失突变体也能被检测到。为了对其表达效率进行量化，通过??ＦＡＣＳ进一步检测这些突变体ＨＮ蛋白相对于野生型ＨＮ蛋白的细胞表面表达效??率（图３）。图３Ａ为ｗｔ及突变体ＨＮ蛋白的代表性的荧光直方图。图３Ｂ为对各??蛋白的细胞表面表达效率进行定量的结果，表示为各突变体....

图４?ＮＤＶ?ＨＮ突变蛋白合胞体形成情况在共同表达ｗｔ或突变的ＨＮ蛋白和Ｆ的单层细胞??上观察合胞体形成情况

将ＮＤＶ?ｗｔ或突变体ＨＮ蛋ｆｔ与其同源Ｆ蛋白在ＢＨＫ－２１细胞屮共同表达。??将转染ＮＤＶ?ｗｔ?Ｆ质粒和空载体的细胞用作阴性对照。转染后２４ｈ进行固定染色，??于倒置显微镜Ｋ观察多核巨细胞，即合胞体的形成情况。如图４所示，与ＮＤＶ?ｗｔ??ＨＮ和Ｆ蛋白相比，这些突变体在与其同....

图５?ＮＤＶ?ＨＮ突变体蛋白促细胞融合活性的定量检测（内容物混合程度）用ｐ－半乳糖苷酶??活性测量突变体ＨＮ蛋白与其同源Ｆ蛋白导致的内容物混合情况

感染重组痘苗病毒后共同表达Ｆ蛋白和野生型或突变型ＨＮ蛋白的ＢＨＫ－２１细胞，??另一群是感染野生型痘苗病毒后单独转染ｐＧｌＮＴ７Ｐ－Ｇａｌ质粒的ＢＨＫ－２１细胞。??定量结果显示（图５?），合胞体形成能力出现减弱的突变体Ｃｈｉ?ｈＰＩＶｌ、Ｃｈｉ＿ｈＰＩＶ２、??Ｃｈｉ＿ＰＩＶ５....

本文编号：3930601