针刺背俞穴对失眠模型大鼠脑组织差异蛋白表达的研究

发布时间：2017-05-27 12:11

  本文关键词：针刺背俞穴对失眠模型大鼠脑组织差异蛋白表达的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的运用蛋白质组学实验,通过液相色谱—质谱技术,构建针刺背俞穴治疗失眠模型大鼠脑组织差异蛋白谱峰,检测出针刺改变睡眠质量与哪些蛋白相关,证明失眠的病理改变及机体针刺后所产生的效应变化,为失眠证的针灸治疗提供有力的实验依据。方法实验共选取150只雄性健康清洁级SD大鼠(200±10g),采用完全随机法将大鼠分为五组,正常喂养观察7天后显示一切正常。随将各组大鼠进行实验处理:空白对照组(A组)不做任何相关处理;正常捆绑对照组(B组)每日进行一次抓取处理,共抓取9天;正常针刺治疗组(C组)在抓取后,自第3天起进行针刺,连续针刺7天;模型对照组(D组)于实验开始阶段应用对氯苯丙氨酸混悬液(PCPA)对大鼠进行腹腔注射,每100g注射lml,共注射2天,抓取从第3天开始,不进行针刺,其中抓取7天;模型针刺治疗组(E组)于实验开始阶段应用对氯苯丙氨酸混悬液(PCPA)对大鼠进行腹腔注射,每100g注射lml,共注射2天,自第3天起每日进行抓取且针刺治疗,其中针刺治疗7天;以上实验结束后取材:大鼠断头处理后,将头部放于冰盘上,用手术剪迅速撬开颅骨轻轻剥离出脑组织;利用液相色谱—质谱技术进行不同组间的差异蛋白表达的分析。结果1.模型对照组与模型针刺治疗组大鼠于首次腹腔注射对氯苯丙氨酸混悬液24-36h后,出现昼夜活动节律紊乱,白天活动频繁,部分大鼠情绪明显躁动不安,通过观察对比,与空白对照组有显著差异。模型针刺治疗组大鼠在进行针刺治疗之后,睡眠及进食饮水均慢慢恢复模型前状态。正常捆绑对照组与正常针刺治疗组两组大鼠生活规律,睡眠习惯及饮食量均无明显改变。2.实验共鉴定到的蛋白质组为(ProteinGroup)3383个,其中两次生物学分析的每个通道皆有定量信息的蛋白质组数分别是2743个和2952个。五组样品中,将各通道标记113、114、115、116、117与通道均值REF做比值,并分析比较其两组之间差异蛋白数量为:A组与D组之间测得163个差异蛋白、A组与E组之间测得203个差异蛋白、B组与E组之间测得245个差异蛋白、D组与E组之间测得118个差异蛋白(其中以Ratio+/-1.2且P value0.05筛选的差异表达蛋白质数)。结论1.实验数据显示,针刺背俞穴对失眠有治疗作用;对失眠模型大鼠进行针刺治疗后,大鼠脑组织蛋白酶解产生的特异性表达可能与针刺治疗失眠的作用机制有一定关联;并用不同刺激方法产生的蛋白表达存在一定的差异。2.模型对照组与模型针刺治疗组质谱分析后发现有一定的重复性,其中一小部分蛋白质存在较为明显差异表达,证明针刺可以改变失眠模型大鼠脑组织蛋白质的差异表达;对于检测出的差异蛋白,可能是由于在针刺治疗失眠之后所产生的。
【关键词】：蛋白 液相色谱—质谱 失眠 背俞穴 针刺
【学位授予单位】：河南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245;R-332
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 实验材料12-13
• 1 实验动物12
• 2 主要实验仪器及试剂12-13
• 实验方法13-20
• 1 动物实验部分13-14
• 2 样品制备14-16
• 3 酶解和肽段定量16
• 4 肽段标记16
• 5 质谱分析16-20
• 实验结果20-29
• 1 大鼠行为学改变20
• 2 样品经裂解后蛋白质定量结果20
• 3 SDS-PAGE 电泳20-21
• 4 酶解肽段浓度测定21
• 5 蛋白质鉴定结果21-22
• 6 显著型差异蛋白22
• 7 差异蛋白功能性的列举22-23
• 8 各组间差异蛋白的表达23-29
• 理论探讨29-44
• 1 对失眠病因病机的认识30-32
• 2 失眠的针灸治疗32-33
• 3 课题立论依据33-37
• 3.1 选题依据33-34
• 3.2 选穴依据34-36
• 3.3 选取大鼠失眠模型36-37
• 4 实验结果分析37-43
• 4.1 影响实验结果的因素37-38
• 4.2 差异表达蛋白的的功能性分类38
• 4.3 差异表达蛋白的的通路分类38-40
• 4.4 各组间差异蛋白点的分析说明40-43
• 5 问题与展望43-44
• 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-49
• 附录1 中英文对照表49-50
• 附录2 完全随机设计分组情况50-53
• 附录3 文献综述53-58
• 参考文献56-58
• 附录4 在校期间论文论著和科研情况58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：399922