人角膜内皮细胞体外增殖的影响因素、分子机理及其激活途径研究
发布时间：2024-12-11 01:31
人角膜内皮(Human Corneal Endothelium, HCE)由单层扁平的六角形HCE细胞构成,是角膜和房水之间的重要屏障,其细胞密度及单层的完整性是维持角膜的正常厚度、透明度及视敏度的关键。成年后,已形成汇合单层的HCE细胞不仅丧失了增殖能力,而且还以每年0.3%-0.6%的速率死亡,局部细胞死亡后只能依赖临近细胞的扩大和移行来修复单层的完整性。一旦受到外界创伤、感染及药物毒害后,HCE细胞的死亡速率便会加快,将造成HCE细胞密度的迅速下降,轻者会引起角膜轻度水肿、透明度降低、视敏度下降,重者将导致HCE失代偿,最终引起角膜内皮盲(少于400～500细胞/mm2),使人失明。现有研究结果显示,成年后已丧失增殖能力的HCE细胞虽然被拘留在细胞周期的G1期,但仍保留有激活后恢复增殖的潜能。许多研究证实,接触抑制和TGF-β2是体内抑制HCE细胞增殖的主要原因,解除其接触抑制状态和加入TGF-β2印制剂能够刺激HCE细胞重新恢复增殖能力,但其具体作用效果和分子机理仍有待于进一步研究。除眼睛内部的影响因素以外,太阳光中的紫外线(UV)也会对HCE细胞造成一定的氧化损伤作用,很可能也...
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 人角膜内皮和人角膜内皮细胞
1.1 人角膜内皮的结构与功能
1.2 人角膜内皮细胞独有的形态特征
2 人角膜内皮细胞的增殖能力及其影响因素
2.1 人角膜内皮细胞的增殖能力
2.1.1 细胞周期
2.1.2 人角膜内皮细胞的增殖特性
2.1.2.1 增殖能力的年龄相关性
2.1.2.2 增殖能力的区域相关性
2.2 接触抑制对人角膜内皮细胞增殖能力的抑制作用
2.3 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖能力的抑制作用
2.3.1 TGF-β的信号传导通路
2.3.2 TGF-β2对人角膜内皮细胞的影响作用
2.4 生长因子对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
2.5 DNA氧化损伤对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3 刺激人角膜内皮细胞增殖的研究进展
3.1 解除接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.2 持续的生长因子刺激对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.3 解除G1期抑制对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.4 其他因素对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.4.1 细胞外基质
3.4.2 ROCK抑制剂
4 人角膜内皮细胞的光损伤及其抗氧化保护剂
5 本研究的目的和意义
第二章 解除细胞接触抑制对人角膜内皮细胞体外增殖能力的影响作用研究
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 细胞接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的影响作用研究
2.1.1 人角膜内皮细胞的体外培养及其接触抑制模型的建立
2.1.2 人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2 EDTA解除接触抑制对HCE细胞的影响作用研究
2.2.1 EDTA处理人角膜内皮细胞形态影响作用的光镜检测
2.2.2 EDTA处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2.3 EDTA处理人角膜内皮细胞中骨架蛋白表达的免疫荧光检测
2.3.4 EDTA处理人角膜内皮细胞中功能蛋白表达的免疫荧光检测
2.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞的影响作用研究
2.3.1 Y-27632处理人角膜内皮细胞的贴壁能力的光镜检测
2.3.2 Y-27632处理人角膜内皮细胞的生长曲线测定
2.3.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞形态影响作用的光镜检测
2.3.4 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞增殖活性影响作用的EdU渗入检测
2.3.5 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞骨架蛋白表达影响作用的免疫荧光检测
2.3.6 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞功能蛋白表达影响作用的免疫荧光检测
2.4 接触抑制人角膜内皮细胞中ROCK1及CKI的Western blot检测
3 实验结果
3.1 接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的影响作用
3.2 EDTA对接触抑制的人角膜内皮细胞的影响作用
3.2.1 EDTA对人角膜内皮细胞形态及生长的影响
3.2.2 EDTA对人角膜内皮细胞骨架的影响
3.2.3 EDTA对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞的影响作用
3.3.1 Y-27632对人角膜内皮细胞贴壁能力的影响
3.3.2 Y-27632对人角膜内皮细胞生长曲线的影响
3.3.3 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞形态的影响
3.3.4 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3.3.5 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞骨架的影响
3.3.6 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞功能蛋白表达的影响
3.4 Y-27632及EDTA对人角膜内皮细胞中ROCK1和CKI表达的影响作用
4 讨论
5 结论
第三章 TGF-B2对人角膜内皮细胞体外增殖能力的影响作用及其分子机理研究
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖的影响作用研究
2.1.1 TGF-β2处理人角膜内皮细胞活力的MTT法检测
2.1.2 TGF-β2处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2 TGF-β2调控HCE细胞增殖的信号通路研究
2.2.1 TGF-β2抑制剂处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2.2 TGF-β2抑制剂处理人角膜内皮细胞的Smad信号通路蛋白及CKI表达的Westernblot检测
3 实验结果
3.1 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖活性的影响作用
3.2 Smad信号通路在TGF-β2调控人角膜内细胞增殖中的作用
3.2.1 TGF-β2及其信号通路抑制剂对人角膜内皮细胞增殖能力的影响作用
3.2.2 TGF-β2和SB431542对Smad信号通路蛋白及CKI表达的影响作用
4 讨论
5 结论
第四章 人角膜内皮细胞氧化损伤的保护
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 建立人角膜内皮细胞的UVB诱导损伤模型
2.1.1 人角膜内皮细胞形态及生长状态的光镜检测
2.1.2 人角膜内皮细胞活力的MTT检测
2.2 UVB照射诱导人角膜内皮细胞损伤的机理研究
2.2.1 人角膜内皮细胞中ROS水平的DHE染色检测
2.2.2 人角膜内皮细胞中DNA氧化损伤的8-OHdG免疫荧光染色检测
2.2.3 人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的Western blot检测
2.3 抗氧化剂对人角膜内皮细胞氧化损伤的保护作用研究
2.3.1 人角膜内皮细胞活力的MTT检测
2.3.2 人角膜内皮细胞形态及生长状态的光镜检测
2.3.3 人角膜内皮细胞中DNA氧化损伤的8-OHdG免疫荧光染色检测
2.3.4 人角膜内皮细胞中ROS水平的DHE染色检测
2.3.5 人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的Western blot检测
3 实验结果
3.1 UVB照射对人角膜内皮细胞的影响作用
3.1.1 UVB照射对人角膜内皮细胞活力的影响作用
3.1.2 UVB照射对人角膜内皮细胞形态及生长的影响
3.1.3 UVB照射人角膜内皮细胞的形态及生长的恢复
3.2 UVB诱导人角膜内皮细胞氧化损伤的分子机理
3.2.1 UVB照射对人角膜内皮细胞中ROS水平的影响作用
3.2.2 UVB照射人角膜内皮细胞在恢复过程中ROS水平的变化
3.2.3 UVB照射人角膜内皮细胞在恢复过程中DNA氧化损伤的变化
3.2.4 UVB照射人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的影响作用
3.3 抗氧化剂对UVB诱导的人角膜内皮细胞氧化损伤的保护作用
3.3.1 四种抗氧化剂对人角膜内皮细胞活力的影响作用
3.3.2 Asc-2P对UVB照射人角膜内皮细胞形态及生长的影响作用
3.3.3 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞DNA氧化损伤的影响作用
3.3.4 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞中ROS水平的影响作用
3.3.5 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的影响作用
4 讨论
5 结论
全文总结
参考文献
致谢
个人简历
在学期间发表的学术论文
本文编号：4015973
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 人角膜内皮和人角膜内皮细胞
1.1 人角膜内皮的结构与功能
1.2 人角膜内皮细胞独有的形态特征
2 人角膜内皮细胞的增殖能力及其影响因素
2.1 人角膜内皮细胞的增殖能力
2.1.1 细胞周期
2.1.2 人角膜内皮细胞的增殖特性
2.1.2.1 增殖能力的年龄相关性
2.1.2.2 增殖能力的区域相关性
2.2 接触抑制对人角膜内皮细胞增殖能力的抑制作用
2.3 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖能力的抑制作用
2.3.1 TGF-β的信号传导通路
2.3.2 TGF-β2对人角膜内皮细胞的影响作用
2.4 生长因子对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
2.5 DNA氧化损伤对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3 刺激人角膜内皮细胞增殖的研究进展
3.1 解除接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.2 持续的生长因子刺激对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.3 解除G1期抑制对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.4 其他因素对人角膜内皮细胞增殖的激活研究
3.4.1 细胞外基质
3.4.2 ROCK抑制剂
4 人角膜内皮细胞的光损伤及其抗氧化保护剂
5 本研究的目的和意义
第二章 解除细胞接触抑制对人角膜内皮细胞体外增殖能力的影响作用研究
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 细胞接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的影响作用研究
2.1.1 人角膜内皮细胞的体外培养及其接触抑制模型的建立
2.1.2 人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2 EDTA解除接触抑制对HCE细胞的影响作用研究
2.2.1 EDTA处理人角膜内皮细胞形态影响作用的光镜检测
2.2.2 EDTA处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2.3 EDTA处理人角膜内皮细胞中骨架蛋白表达的免疫荧光检测
2.3.4 EDTA处理人角膜内皮细胞中功能蛋白表达的免疫荧光检测
2.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞的影响作用研究
2.3.1 Y-27632处理人角膜内皮细胞的贴壁能力的光镜检测
2.3.2 Y-27632处理人角膜内皮细胞的生长曲线测定
2.3.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞形态影响作用的光镜检测
2.3.4 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞增殖活性影响作用的EdU渗入检测
2.3.5 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞骨架蛋白表达影响作用的免疫荧光检测
2.3.6 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞功能蛋白表达影响作用的免疫荧光检测
2.4 接触抑制人角膜内皮细胞中ROCK1及CKI的Western blot检测
3 实验结果
3.1 接触抑制对人角膜内皮细胞增殖的影响作用
3.2 EDTA对接触抑制的人角膜内皮细胞的影响作用
3.2.1 EDTA对人角膜内皮细胞形态及生长的影响
3.2.2 EDTA对人角膜内皮细胞骨架的影响
3.2.3 EDTA对人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3.3 Y-27632对EDTA处理人角膜内皮细胞的影响作用
3.3.1 Y-27632对人角膜内皮细胞贴壁能力的影响
3.3.2 Y-27632对人角膜内皮细胞生长曲线的影响
3.3.3 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞形态的影响
3.3.4 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞增殖能力的影响
3.3.5 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞骨架的影响
3.3.6 Y-27632对EDTA处理的人角膜内皮细胞功能蛋白表达的影响
3.4 Y-27632及EDTA对人角膜内皮细胞中ROCK1和CKI表达的影响作用
4 讨论
5 结论
第三章 TGF-B2对人角膜内皮细胞体外增殖能力的影响作用及其分子机理研究
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖的影响作用研究
2.1.1 TGF-β2处理人角膜内皮细胞活力的MTT法检测
2.1.2 TGF-β2处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2 TGF-β2调控HCE细胞增殖的信号通路研究
2.2.1 TGF-β2抑制剂处理人角膜内皮细胞增殖能力的EdU渗入检测
2.2.2 TGF-β2抑制剂处理人角膜内皮细胞的Smad信号通路蛋白及CKI表达的Westernblot检测
3 实验结果
3.1 TGF-β2对人角膜内皮细胞增殖活性的影响作用
3.2 Smad信号通路在TGF-β2调控人角膜内细胞增殖中的作用
3.2.1 TGF-β2及其信号通路抑制剂对人角膜内皮细胞增殖能力的影响作用
3.2.2 TGF-β2和SB431542对Smad信号通路蛋白及CKI表达的影响作用
4 讨论
5 结论
第四章 人角膜内皮细胞氧化损伤的保护
1 实验材料与用品
1.1 实验材料
1.2 实验仪器
1.3 实验药品及试剂
1.4 几种主要溶液的配方
2 实验方法
2.1 建立人角膜内皮细胞的UVB诱导损伤模型
2.1.1 人角膜内皮细胞形态及生长状态的光镜检测
2.1.2 人角膜内皮细胞活力的MTT检测
2.2 UVB照射诱导人角膜内皮细胞损伤的机理研究
2.2.1 人角膜内皮细胞中ROS水平的DHE染色检测
2.2.2 人角膜内皮细胞中DNA氧化损伤的8-OHdG免疫荧光染色检测
2.2.3 人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的Western blot检测
2.3 抗氧化剂对人角膜内皮细胞氧化损伤的保护作用研究
2.3.1 人角膜内皮细胞活力的MTT检测
2.3.2 人角膜内皮细胞形态及生长状态的光镜检测
2.3.3 人角膜内皮细胞中DNA氧化损伤的8-OHdG免疫荧光染色检测
2.3.4 人角膜内皮细胞中ROS水平的DHE染色检测
2.3.5 人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的Western blot检测
3 实验结果
3.1 UVB照射对人角膜内皮细胞的影响作用
3.1.1 UVB照射对人角膜内皮细胞活力的影响作用
3.1.2 UVB照射对人角膜内皮细胞形态及生长的影响
3.1.3 UVB照射人角膜内皮细胞的形态及生长的恢复
3.2 UVB诱导人角膜内皮细胞氧化损伤的分子机理
3.2.1 UVB照射对人角膜内皮细胞中ROS水平的影响作用
3.2.2 UVB照射人角膜内皮细胞在恢复过程中ROS水平的变化
3.2.3 UVB照射人角膜内皮细胞在恢复过程中DNA氧化损伤的变化
3.2.4 UVB照射人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的影响作用
3.3 抗氧化剂对UVB诱导的人角膜内皮细胞氧化损伤的保护作用
3.3.1 四种抗氧化剂对人角膜内皮细胞活力的影响作用
3.3.2 Asc-2P对UVB照射人角膜内皮细胞形态及生长的影响作用
3.3.3 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞DNA氧化损伤的影响作用
3.3.4 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞中ROS水平的影响作用
3.3.5 Asc-2P对UVB照射的人角膜内皮细胞中p53、p-p53及p21Cipl表达的影响作用
4 讨论
5 结论
全文总结
参考文献
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本文编号：4015973
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