柯萨奇病毒B组3型结构蛋白VP2对心肌细胞损伤的机制初探

发布时间：2025-02-15 11:21

　　目的:初步探究柯萨奇病毒B组3型（Coxsackies virus,CVB3）的结构蛋白VP2对心肌细胞的影响,为研究CVB3引起病毒性心肌炎的致病机制提供理论基础。方法:1.以CVB3病毒RNA为模板,逆转录为cDNA,PCR扩增VP2基因,同时构建蛋白融合表达质粒pCAG-2Strep-Flag-VP2,pCAG-2Strep-Flag-VP2-APEX2和腺病毒载体pAdTrack-2Strep-Flag-VP2,pAdTrack-2Strep-Flag-VP2-APEX2,并包装成重组腺病毒颗粒Ad-VP2和Ad-VP2-APEX2,扩增后测定重组腺病毒颗粒的滴度;2.原代心肌细胞的提取:取新生SD大鼠（1-3天）心肌组织,研磨至1-3mm³的组织块,用0.1%的胰酶消化8-10次,每次10分钟,离心收集细胞,差速贴壁2h后获得搏动的心肌细胞;3.以Ad-VP2（MOI=10）感染心肌细胞后观察光学显微镜下细胞形态变化;4.通过CCK8方法检测Ad-VP2（MOI=10）感染心肌细胞后0 h,24 h,48h,72 h的细胞增殖变化;5.Ad-VP2-APE...

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图1.4APEX2系统筛选相互作用蛋白流程图

图1.4APEX2系统筛选相互作用蛋白流程图Fig1.4TheprotocolforscreeningtheinteractingproteinoftargetproteinbyAEPX2.1.5S100A6蛋白S100蛋白家族是一种Ca2+....

图1.6技术路线

第1章引言作为肿瘤诊断的标志物[53]。与此同时，S100A6也被证实与多种心血管疾病相，在急性冠脉综合征中，S100A6表达显著高于正常对照组。TNF-α可以通过-κB途径诱导S100A6的表达，S100A6使p53磷酸化产生抑制心肌细胞凋亡作用[54]....

图2.2.2.1腺病毒重组质粒的构建及重组腺病毒的制备Figure2.2.2.1Theprocdureofconstructiontheadenoviralrecombinantplasmidandproductionofrecombinantadenovirus.

14图2.2.2.1腺病毒重组质粒的构建及重组腺病毒的制备Figure2.2.2.1Theprocdureofconstructiontheadenoviralrecombinantplasmidandproductioofrecombinantad....

图3.1.1.1PCR扩增VP2和APEX2基因Fig3.1.1.1AmplicationofVP2andAPEX2genesbyPCR.(A)VP2.(B)APEX2.M:2kbDNALadder.

第3章结果第3章结果组腺病毒Ad-VP2-APEX2和Ad-VP2的构建与表达重组腺病毒载体的构建.构建重组质粒pCAG-2Strep-Flag-VP2-APEX2和pCAG-2Strep-FlaB3cDNA和本实验室质粒pCDNA3.1(-)-....

本文编号：4034230