类泛素折叠修饰蛋白在内皮细胞炎症反应中的作用研究

发布时间：2017-06-11 20:06

  本文关键词：类泛素折叠修饰蛋白在内皮细胞炎症反应中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本研究旨在探讨类泛素折叠修饰蛋白Ufm1在人脐静脉内皮细胞炎症反应中的表达及作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法:免疫荧光法观察Ufm1在内皮细胞中的表达和定位。使用浓度为100ng/ml的脂多糖LPS体外处理人脐静脉内皮细胞系HUVECs,分别刺激0h、3h、6h、12h、24h、48h后,采用Real-Time PCR检测炎性细胞因子(TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1)和Ufm1的m RNA水平,同时通过Western blotting检测Ufm1蛋白水平的变化。另外,构建Ufm1过表达质粒,转染质粒至HUVECs,经LPS刺激3h后,采用Real-Time PCR检测各组中上述炎性细胞因子的变化。Western blotting法检测NF-κB的总蛋白表达量及其入核量,以探讨Ufm1抑制HUVECs炎性细胞因子表达的可能分子机制。结果:Ufm1蛋白在HUVECs的细胞核和细胞质中均有表达。在LPS诱导HUVECs炎症反应中,主要炎性细胞因子TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1的m RNA水平随着时间变化而升高,并且在刺激后3-6h达到高峰,且有统计学差异(p0.05)。同时,Ufm1的m RNA水平和蛋白表达量也随着时间的变化而上调,且具有时间依赖性。过表达Ufm1后,LPS诱导产生的相关炎性细胞因子表达量显著降低。与对照组相比,Toll样受体通路中NF-κB P65在LPS刺激后入核增多,但过表达Ufm1后p65入核减少。结论:Ufm1在人脐静脉内皮细胞HUVECs中存在表达,并定位于细胞核和细胞质;在LPS诱导的HUVECs炎症反应中,Ufm1的m RNA及蛋白水平均上调;Ufm1过表达可显著抑制LPS诱导的HUVECs炎性细胞因子的表达;Ufm1可能通过TLR4-NF-κB信号通路发挥抑制内皮细胞炎症反应的作用。
【关键词】：类泛素折叠修饰蛋白 脂多糖 炎症反应 NF-?B 动脉粥样硬化
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R364.5
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 引言8-13
• 材料与方法13-28
• 1.1 试剂和仪器13-15
• 1.1.1 细胞13
• 1.1.2 主要试剂13-14
• 1.1.3 主要仪器14-15
• 1.2 主要试验方法15-27
• 1.2.1 人脐静脉内皮细胞系HUVECs的培养15-16
• 1.2.2 细胞免疫荧光16-17
• 1.2.3 Ufm1质粒的扩增、抽提及纯化17-19
• 1.2.4 HUVECs细胞干预实验19-20
• 1.2.5 Real-time PCR检测HUVECs目的基因的表达20-22
• 1.2.6 Western blotting检测HUVECs目的蛋白的表达22-25
• 1.2.7 核质分离试剂盒检测NF-kB的表达分布25-27
• 1.3 统计学方法27-28
• 结果28-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-44
• 致谢44-45
• 附录A45-46
• 附录B46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：442352