胚胎期小鼠耳周间充质差异表达基因的研究

发布时间：2017-06-11 21:03

  本文关键词：胚胎期小鼠耳周间充质差异表达基因的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用基因芯片技术检测内耳发育过程中耳周间充质差异表达的基因并鉴定其表达,筛选促进耳蜗感觉前体细胞增殖分化的关键基因。方法:利用Mouse TGF?/BMP Signaling Pathway基因芯片检测E12.5、E13.5及新生鼠耳蜗感觉上皮紧邻的间充质的差异表达基因,应用实时定量PCR对部分差异表达基因(Mecom、Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2)进一步验证,应用免疫荧光标记技术检测Mecom蛋白在内耳早期发育中的时空表达模式。结果:1.基因芯片筛选耳周间充质差异表达基因结果发现E13.5比E12.5样本具有明显差异表达的基因有11个,其中有6个基因显著上调(Cdkn2b、Fos、Gsc、Herpud1、Tgfb1、Tgfb2),5个基因显著下调(Bmpr1b、Fst、Gdf3、Mecom、Tgfbr1)(差异倍数均在2倍以上)。其中Gdf3基因表达量E13.5比E12.5样本下降2.13倍,但p=0.44,没有统计学差异。其余10个基因均有统计学差异(p0.05)。新生鼠比E12.5样本具有明显差异表达的基因有35个,其中有25个基因显著上调,10个基因显著下调(差异倍数均在2倍以上)。其中Col1al、Igfbp3、Il6、Gdf2、Gdf7、Nodal、Serpine基因虽然差异倍数均在2倍以上,但p值均大于0.05,没有统计学差异。其余28个基因p0.05,均有统计学差异。2.Real Time PCR验证分析E12.5、E13.5和新生鼠耳周间充质样本中部分差异表达基因(Mecom、Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2)水平,结果发现:Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2三个基因E13.5比E12.5、新生鼠比E12.5及新生鼠比E13.5的基因表达水平明显上调,与基因芯片的筛选结果一致,具有统计学差异(p0.05)。Mecom基因E13.5比E12.5、新生鼠比E12.5、新生鼠比E13.5的基因表达水平明显下调,与基因芯片的筛选结果一致,具有统计学意义(p0.05)。3.Mecom蛋白在小鼠内耳早期发育中的表达模式在E10.5,Mecom广泛表达在听泡周围间充质及耳蜗前庭神经节,在听泡区域有弱表达。随后,在内耳感觉上皮的表达进一步变弱,到E13.5基本局限在耳周间充质及部分螺旋神经节及前庭神经节。Sox2开始在听泡区及神经节均有表达,随后在腹内侧表达逐渐减弱,随着前感觉区及感觉区的形成,逐渐局限在感觉细胞及耳蜗前庭神经节。结论:小鼠内耳发育过程中耳周间充质基因表达存在差异,其差异可能与内耳感觉前体细胞增殖分化能力不同密切相关,分析这些表达存在显著差异的基因有助于我们了解内耳发育机制,为毛细胞再生的研究提供线索。
【关键词】：间充质 毛细胞 基因芯片 差异表达 基因
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R321.5
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 研究材料（资料与内容）与方法14-31
• 1. 研究内容14
• 1.1 利用基因芯片技术筛选小鼠耳周间充质差异表达的基因14
• 1.2 应用实时定量PCR验证小鼠耳周间充质表达显著差异的基因14
• 1.3 Mecom蛋白在小鼠内耳早期发育中的表达模式14
• 2. 实验动物和材料14-19
• 2.1 实验动物14
• 2.2 实验材料14-18
• 2.3 实验主要仪器18-19
• 3. 主要实验方法19-31
• 3.1 间充质提取19-20
• 3.2 小鼠耳蜗冰冻切片制作20-21
• 3.3 免疫组织化学荧光染色21
• 3.4 PCR Assay实验操作步骤21-27
• 3.5 Real Time PCR（RT-PCR）27-31
• 结果31-40
• 讨论40-47
• 结论47-48
• 参考文献48-55
• 综述 PRDM 蛋白：信号传导和转录调节的分子机制55-73
• 参考文献64-73
• 作者简介及读研期间主要科研成果73-74
• 致谢74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘少锋,周梁,李华伟,沈云珍;胚胎小鼠耳蜗感觉上皮的形态发生[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2005年07期

  本文关键词：胚胎期小鼠耳周间充质差异表达基因的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：442438