构建人三叶因子3腺病毒载体对胆管上皮细胞迁移的调控作用

发布时间：2017-07-08 09:15

  本文关键词：构建人三叶因子3腺病毒载体对胆管上皮细胞迁移的调控作用

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【摘要】：目的构建含有人三叶因子3(trefoil factor family 3,TFF3)基因的腺病毒载体,并观察其对胆管上皮细胞迁移的调控作用。方法利用PCR技术对目的基因TFF3全长进行扩增,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒构建载体pAdTrack-CMV-TFF3,转化至含腺病毒骨架质粒pAd-Easy的大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,筛选重组子并经内切酶PacⅠ线性化,转染293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定。构建的TFF3腺病毒载体感染人胆管上皮细胞后用RT-PCR及Western blot检测目的基因表达水平,并进行划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果成功扩增了大小约为458 bp的人TFF3基因,测序报告显示目的基因序列与NCBI报道一致;成功构建了TFF3的同源重组腺病毒穿梭载体,经293细胞包装及扩增的病毒滴度为1.3×109CPU/mL。RT-PCR及Western blot结果显示转染人胆管上皮细胞后其TFF3表达明显增强,细胞迁移能力也明显高于对照组。结论成功构建含TFF3基因的腺病毒载体,为进一步研究TFF3在胆管上皮损伤修复中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所;
【关键词】： TFF基因 腺病毒载体 重组 损伤修复 细胞迁移
【基金】：国家自然科学基金(30972948)~~
【分类号】：R363
【正文快照】： 三叶因子3(trefoil factor family 3,TFF3)属三叶肽家族成员之一,其单聚体相对分子质量为6.7×103。编码人TFF3的基因位于21号染色体长臂21q22.3区,其cDNA全长为222 bp,共编码73个氨基酸,前14个为信号肽,后59个为成熟氨基酸。生理状态下,TFF3主要高表达于大肠、小肠及胃窦黏

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本文编号：533886