慢病毒载体转录通读率检测方法的建立

发布时间：2017-07-31 10:14

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【摘要】：慢病毒载体作为一种有效的生物研究和基因治疗载体,近年来正受到广泛关注,而转录通读现象则是限制其被使用的主要生物安全性瓶颈之一。为了评估慢病毒载体在整合入染色体后的转录通读的实际情况,需要建立一种有效的检测转录通读率的方法。文中运用分子生物学等手段,将相关质粒瞬时转染入293T细胞,模拟野生型和自灭活型慢病毒载体整合入染色体后的情况,利用实时荧光定量PCR分别定量转录通读和总转录本在慢病毒载体上的特征序列,并计算出转录通读率;同时使用流式细胞计数等技术,检测转录通读后的GFP蛋白产物。两种检测结果均与理论相符,即自灭活型载体具有更高的转录通读率。说明文中所建立的方法有效可靠,为进一步评估和降低慢病毒载体的转录通读率,提高慢病毒载体的生物安全性的研究提供技术支持。
【作者单位】： 上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院;上海交通大学医学遗传研究所;卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室暨上海市胚胎与生殖工程重点实验室;
【关键词】： 慢病毒载体 自灭活慢病毒载体 转录通读率 安全性
【基金】：国家自然科学基金(No.81271690) 国家重大基础研究发展计划(973计划)(No.2010CB945202) 上海市自然科学基金(No.11ZR1429900)资助~~
【分类号】：R346
【正文快照】： 转录通读(Read-through)是指RNA聚合酶复合物在转录过程中遇到转录终止信号(如AAUAAA signal)时不能被正常终止,而是读过终止信号继续转录下游DNA序列的现象(图1)。它经常发生在病毒或病毒载体基因的转录过程中。目前广泛使用的第3代慢病毒载体经过了自灭活改造(删除U3启动子)

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本文编号：598633