人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

发布时间：2017-08-01 00:07

  本文关键词：人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

  更多相关文章： 单链二硫键稳定抗体 亲和力 原核表达 破伤风痉挛毒素C端

【摘要】：目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所疫苗与抗体工程研究室 全军生物武器损伤防治药物重点实验室;解放军第302医院临床检验医学中心 全军感染病临床实验诊断中心;解放军第302医院感染性疾病研究与诊疗中心;
【关键词】： 单链二硫键稳定抗体 亲和力 原核表达 破伤风痉挛毒素C端
【基金】：国家杰出青年科学基金(81025018) 国家自然科学基金青年基金(81102360,81172980)
【分类号】：R392.12
【正文快照】： 破伤风杆菌痉挛毒素与同菌属的肉毒杆菌神经毒素均属于A类战剂,前者毒性仅次于后者,是已知第二强的生物毒素[1]。破伤风梭状芽孢杆菌产生的痉挛毒素由A、B、C三个片段组成,其中C片段为其重链C端(TeNT-Hc),介导痉挛毒素向神经细胞表面受体-神经节苷脂的聚集,具有结合神经细胞

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 张远;王永强;高世君;李万民;;动物性食品中抗生素残留的危害及防控[J];广西农业科学;2006年01期

2 刘媛,丁岚,谢孟峡,刘素英,杨清峰,单吉浩;动物组织中阿莫西林残留的液相色谱分析方法研究[J];色谱;2003年06期

3 王红;吴萌;赵宝华;赵亚朴;;抗大豆Ⅱ号亚型钙调素单克隆抗体的制备与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年01期

4 张剑勇;兽药残留监测与动物性食品安全卫生[J];中国兽药杂志;2001年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李家旭;孙大业;;植物及动物钙调素抗体免疫反应特性的比较研究[J];Journal of Integrative Plant Biology;1992年04期

2 黄建生,任大明;affinity与avidity[J];细胞生物学杂志;1999年02期

3 周庆申;L-链N-末端及补体决定区3上的氨基酸残基改变增加人类N血型抗原重组F(ab)亲和力[J];国外医学.输血及血液学分册;2004年03期

4 张磊,李卓娅,刘丽江,姜小丹;GFP-TNF融合蛋白的制备及在亲和力研究中的运用[J];江汉大学学报(自然科学版);2005年02期

5 蔡昆;王慧;包士中;史晶;侯晓军;荫俊;;人源抗狂犬病毒单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达[J];微生物学报;2007年04期

6 解鹏;李s，

本文编号：601687