人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达

发布时间：2017-08-02 09:25

  本文关键词：人MT2A基因在哺乳动物细胞株中的定位与表达

  更多相关文章： 金属硫蛋白 细胞定位 转染 免疫印迹

【摘要】：目的用基因克隆方法构建带FLAG-tag的人金属硫蛋白2A(MT2A)真核表达载体,用其转染HEK 293T,COS-7细胞观察MT2A在增殖细胞内的表达和定位。方法设计带FLAG-tag的引物,以人MT2A全长cDNA序列的质粒为模板,PCR法扩增MT2A全长序列,然后插入pCDNA 3.1中构建pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;将构建的质粒转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测;脂质体法转染至COS-7细胞,荧光显微镜下观察MT2A表达的蛋白在细胞内定位。结果正确构建了pCDNA 3.1-MT2A-FLAG质粒;其在HEK 293T细胞中能有效地表达;免疫荧光实验表明在COS-7细胞中,MT2A主要分布在细胞质内。结论该研究结果为了解MT2A在细胞内与其他蛋白质相互作用及功能提供了一定的基础。
【作者单位】： 安徽医科大学生命科学学院生物学教研室;
【关键词】： 金属硫蛋白 细胞定位 转染 免疫印迹
【基金】：安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号:KJ2010A187) 安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M170);安徽省自然科学基金项目(编号:11040606M164)
【分类号】：R341
【正文快照】： 人金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量(6 000～7 000)、富含半胱氨酸、可被金属诱导的特异蛋白[1]。根据其氨基酸残基及所带电荷不同,MT分为MT1、MT2、MT3、MT4 4个亚型,其中MT1、MT2在哺乳动物所有细胞中都有表达。MT具有广泛的生物学特性,包括对重金属的解毒作

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吉萍;牛明福;邵勇;高丽华;胡显文;;乙型肝炎病毒PreS2蛋白研究进展[J];生物技术通讯;2011年04期

2 ;[J];;年期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王文慧;张宝旭;路雪艳;李林峰;;金属硫蛋白的光保护作用:金属硫蛋白基因敲除小鼠对UVB照射的反应[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年

2 蒋与刚;刘佃辛;葛玉章;韦京豫;郭长江;高兰兴;;金属硫蛋白对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用研究[A];中国营养学会第六届微量元素营养学术会议论文摘要汇编[C];1999年

3 何冰;雍政;徐卓立;郭军华;;利用蛋白质芯片质谱分离纯化金属硫蛋白[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

4 蒋与刚;郭长江;高兰兴;顾景范;;锌诱导金属硫蛋白合成及其对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用[A];中国营养学会第八次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2000年

5 雍政;何冰;徐卓立;郭军华;;硒诱导金属硫蛋白的分离、纯化与鉴定[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

6 雷志明;阮明;邱飞婵;魏雪涛;李雪婷;贾凤兰;尚兰琴;张宝旭;;二甲基苯蒽对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的影响[A];2003年全国免疫毒理学术交流会论文集[C];2003年

7 耿乃志;崔燕;;金属硫蛋白的研究进展[A];2009年全国基层优秀中医表彰大会暨全国第二次民间验方、诊疗技术学术研讨会会议论文集[C];2009年

8 薛婧;杨曦;张伟;;人FcαRI(CD89)三种不同剪接形式的克隆表达、细胞定位及生物学功能的初步鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

9 谢玲;项晓琼;胡迎春;范宝星;霍艳英;李邦印;段瑞峰;张开泰;吴德昌;;细胞定位与信号通路检测技术在hrnt-1基因功能研究中的应用[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全国中青年学术交流会论文汇编[C];2001年

10 张西正;郭勇;赵云山;武继民;李瑞欣;;交变拉伸应变及压应力对大鼠成骨细胞FOS蛋白表达及细胞定位的影响[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 吴毅;探索“天人合一”的奥秘[N];医药经济报;2001年

2 张中桥;可诱导性真核表达载体构建成功[N];中国医药报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈伟强;心理应激条件下脑金属硫蛋白的表达及其调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年

2 夏荣;白细胞介素—6诱导相关新基因的功能研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年

3 刘月明;人新基因EOLA1生物学特性及相互作用蛋白研究[D];第三军医大学;2004年

4 郑起;人脑金属硫蛋白MT3结构对其性质和功能的影响[D];复旦大学;2004年

5 杜可军;人lrg基因的表达分布及功能的初步分析[D];第四军医大学;2004年

6 曹根涛;人类基因CREB4和4.10的克隆和功能研究[D];复旦大学;2004年

7 陶鹏;SARS冠状病毒N蛋白的细胞定位及其RNA干扰研究[D];重庆医科大学;2005年

8 唐键;微图案化表面的制备以及细胞间接触影响干细胞分化的研究[D];复旦大学;2010年

9 祝辉;人精子发生相关基因NYD-SP6的功能研究[D];南京医科大学;2006年

10 廖爱军;大鼠体内气管损伤修复过程中气管干细胞定位及Shh动态变化的研究[D];中国医科大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 颜利求;锌诱导金属硫蛋白表达对缺血/再灌注损伤家兔心肌的保护作用[D];天津医科大学;2005年

2 徐秋岚;人胎盘组织中间充质干细胞的定位及其生物学特性[D];苏州大学;2007年

3 王波;吸烟相关剂量镉对大鼠肾脏形态和功能影响的实验研究[D];吉林大学;2009年

4 袁菊;HCVp7蛋白反式调节基因p7TP2生物学功能的研究[D];西北农林科技大学;2007年

5 阳海鹰;金属硫蛋白对丁烯酸内酯致氧化损伤的保护作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

6 代忠明;小鼠lrp的克隆表达及功能的初步研究[D];第四军医大学;2006年

7 陈川;PTD-Trim5α和PTD-Trim5αH（R328-332）在大肠杆菌中的表达优化及其作用机制研究[D];暨南大学;2010年

8 陆挺;小鼠LPAAT基因的克隆和鉴定[D];苏州大学;2007年

9 王鑫;分枝杆菌同源膜锚定表达载体的构建与细胞定位分析[D];苏州大学;2011年

10 王庆华;铅、镉联合对SD大鼠肾细胞的毒性损伤及硒的保护作用[D];扬州大学;2006年

，

本文编号：608596