重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定
本文关键词：重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定
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【摘要】：目的构建重组人C反应蛋白(rhCRP)甲醇酵母分泌表达菌株,表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上,经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中,利用甲醇诱导进行分泌表达,并用组氨酸标签进行亲和层析纯化rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting检测表达、纯化的目的蛋白,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其免疫反应性和稳定性。结果成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP,重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103的rhCRP;一步纯化即得纯度为90.42%的目的蛋白,间接ELISA法检测表明,纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。结论利用甲醇酵母表达系统,成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP,为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。
【作者单位】： 大连大学医学院;大连大学生命科学与技术学院;
【关键词】： C反应蛋白质 甲醇酵母 诱导表达 分泌表达 免疫反应性
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31070822) 辽宁省教育厅高校科研计划项目(L2010015)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是目前发现的重要急性时相反应蛋白之一。其作为灵敏的炎症指标、良好的心血管疾病发病诊断及其发病风险预测指标,对于许多疾病的筛查、监测以及疗效评估具有重要价值[1-3]。目前商品化的CRP及其检测试剂多依赖进口,价格昂贵,阻碍了其临床
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