抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备

发布时间：2017-08-25 17:14

  本文关键词：抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备

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【摘要】：【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单抗效价分别为1∶105和1∶2×105,亲和常数分别为2.5×106和2.3×106。制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的亚型均为IgG1类型。【结论】制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体具有较高的效价和较强的亲和力,可用于进一步研究Zhangfei蛋白在机体中的生理作用。
【作者单位】： 宝鸡市陈仓区慕仪镇政府;太白县畜牧兽医技术推广站;宝鸡市兽医局;西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点实验室;
【关键词】： Zhangfei蛋白 抗体效价 细胞融合 单克隆抗体 特异性
【基金】：国家自然科学基金项目(39970544) 西北农林科技大学青年骨干教师支持计划项目(01140305)
【分类号】：R392
【正文快照】： Zhangfei蛋白是碱性亮氨酸拉链蛋白家族的成员之一[1],其分子质量为28.9ku,是内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)[2]和非折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR)过程中参与调节的转录因子之一[3]。研究表明,UPR在胚胎发育、人类疾病等生理和病理过程中具有

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 王永成,常文保,郭振泉;雌三醇单克隆抗体的制备与表征[J];北京大学学报(自然科学版);2002年04期

2 白丽,钱金h?,王晶;应用辛酸硫酸胺法提取小鼠腹水和血清中的IgG抗体[J];大理医学院学报;2000年04期

3 郭杰标;郭锐;刘艳华;;以抗体竞争结合抗原测定单抗亲和力常数的研究[J];南方医科大学学报;2006年07期

4 李容,熊冬生,邵晓枫,李长辉,许元富,刘嘉,杨纯正;抗人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体的制备[J];免疫学杂志;2003年03期

5 肖国平,陈飞,邵景东,姚永华,戴先礼;盐酸克仑特罗单克隆抗体的研制[J];动物科学与动物医学;2003年07期

6 曹军平，闫桂玲，，刘秀梵，张如宽;两种简易高效的单克隆抗体提纯方法[J];细胞与分子免疫学杂志;1995年02期

7 张鸯;史薇;靳亚平;路保通;翁伟平;郭廷伟;;Zhangfei融合蛋白的纯化及其免疫效果[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2008年10期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 杜根成;分泌抗氨苄青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[D];河南农业大学;2005年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王轶敏;王新庄;李金辉;李义书;冯勋伟;;不同培养系统和传代方法对昆明白小鼠原始生殖细胞分离培养的影响[J];安徽农业科学;2008年12期

2 杨素芳;崔奎青;陈华海;韦精卫;韦兰锋;石德顺;;兔皮肤成纤维细胞的体外培养和NESTED-PCR支原体污染检测[J];安徽农业科学;2008年13期

3 刘萍;王海飞;汪劲能;陆艳凤;赵西彪;丁家桐;;Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究[J];安徽农业科学;2008年15期

4 董社琴;李冰雯;;对节白蜡愈伤组织诱导的研究[J];安徽农业科学;2008年26期

5 王怡;管鹏飞;薛整风;成勇;;利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别[J];安徽农业科学;2009年16期

6 毕琳;李键;王中乾;;小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期

7 周德存;;人幼儿心肌细胞体外培养的实验研究[J];安徽医学;2009年01期

8 朱晓峰,张荣华,彭柯萍;益骨胶囊含药血清对体外培养成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响[J];安徽中医学院学报;2003年02期

9 李芳,朱怀仕,韩志强,陈刚,高庆蕾,贾平,张阿丽,奚玲,徐茜,廖国宁,王世宣,卢运萍,马丁;趋化因子受体及配体在卵巢癌细胞迁移中的作用[J];癌症;2005年01期

10 薛英;潘晓梅;黄炯;徐亚萍;刘宏;王彩霞;张莉;;不同条件下转化BHK-21细胞冻存复苏效果比较[J];现代农业科技;2010年18期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 赵玉秀;梁宏阳;马可;赵硕;李爱灵;苏桂民;张月兰;王辉;;鸡胚细胞疫苗制品宿主细胞蛋白残留量检测方法的建立[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年

2 王治国;袁耀明;;乳腺上皮细胞体外培养的研究进展[A];第三届中国奶牛发展大会论文集[C];2008年

3 郭勇;张西正;魏严;张永红;;新生大鼠心肌细胞的体外培养和工程化心肌组织的初步构建[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年

4 王林美;范琦;张波;叶博;赵振军;李树英;;柞蚕蛹卵巢原代细胞培养方法的研究[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集（3）[C];2009年

5 赵康峰;郭宝岚;张少平;孔建;治洪;刘景兰;张月;李毅民;;脑星型胶质细胞改进培养法[A];中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第六届全国学术会议、中国毒理学会遗传毒理专业委员会第五届全国学术会议、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会学术会议、广东省环境诱变剂学会学术会议论文汇编[C];2008年

6 程树军;杜淑娟;邹志飞;;ESC与PHBV体外构建新型化妆品检测用皮肤的初步研究[A];2006年中国化妆品学术研讨会论文集[C];2006年

7 王春生;杜文敬;原璐;安铁洙;;绵羊高硫角蛋白启动子(B2C)表达活性研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

8 梁洋;王春生;原璐;安铁洙;;转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞系的建立[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年

9 田长永;杨景晁;宋连喜;范强;庄岩;王立阁;鄂禄祥;柳志余;马泽芳;;辽宁绒山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）[C];2010年

10 李萍;梁雅慧;黄启福;赵京霞;刘欣;戴淼可;;三氧化二砷调节基质金属蛋白酶-1,-2,-9的活性[A];2009年全国中药学术研讨会论文集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年

2 邵凌健;槐糖脂补料发酵及抗真菌、抗肿瘤活性的研究[D];山东大学;2010年

3 林源吉;K562及其耐药株K562/A02细胞膜蛋白与耐药机理的研究[D];浙江大学;2010年

4 杜瑞平;t10，c12-CLA对猪皮下和背最长肌脂肪沉积的差异性调控机理研究[D];内蒙古农业大学;2010年

5 李东杰;人脐带间充质干细胞促进创面愈合及体外诱导分化为表皮样细胞的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

6 袁烁;化瘀消ve杀胚法对输卵管妊娠影响的临床与实验研究[D];广州中医药大学;2011年

7 梁洋;蜘蛛拖丝蛋白基因Spidroin1嵌合体小鼠的研究[D];东北林业大学;2011年

8 赵丽;三种重金属单抗的制备与抗体基因序列分析及其免疫检测方法的建立[D];内蒙古农业大学;2011年

9 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年

10 姚佳;孕酮与干扰素-τ对体外培养的牛子宫内膜细胞基因组表达谱的影响[D];四川农业大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 田振华;伴与不伴脂肪细胞共培养状态下IL-6对人单核/巨噬细胞增殖和功能的影响[D];南京医科大学;2009年

2 宋晓娣;笋用竹的组织培养研究[D];中南林业科技大学;2009年

3 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年

4 王骏俊;鸡血清IgG的纯化及其单抗制备与鉴定[D];安徽农业大学;2010年

5 金晶;牦牛血IgG分离纯化工艺研究[D];甘肃农业大学;2010年

6 何淑玲;红芪高产配套栽培技术试验研究[D];甘肃农业大学;2010年

7 王云丹;阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响[D];湖南中医药大学;2010年

8 李永忠;壮骨镇痛胶囊含药和血浆对共育体系中破骨细胞活性及凋亡的影响的实验研究[D];湖南中医药大学;2010年

9 鲍腾飞;铁皮石斛组织快繁及生物反应器培养研究[D];浙江农林大学;2010年

10 郭雪阳;两种星鲽组织细胞系的建立及三丁基氧化锡对其毒性作用的研究[D];中国海洋大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李华,俞建昆,洪超,龙润乡,翟友刚,徐琼芳,崔萍芳,丁雪凤,谢忠平;残余牛血清蛋白ELISA检测方法的建立及其初步应用[J];标记免疫分析与临床;2005年02期

2 王付民,高延玲,康相涛;兽药残留的危害及监控防范措施[J];当代畜禽养殖业;2004年01期

3 白丽，钱金h?;CELISA法的建立及其在免疫导向药物制备过程中的应用[J];大理医学院学报;1996年03期

4 杨明亮;世纪之毒二恶英[J];湖北预防医学杂志;1999年06期

5 周立靖,段海锋,董士元,王秋丰;动物性食品的安全性及其监控[J];饲料工业;2003年04期

6 李华;奶制品中抗生素的检测[J];福建轻纺;2001年12期

7 金声,周浣芳,常文保,慈云祥,郭振泉;酶联免疫吸附法直接测定血清雌二醇[J];分析化学;1994年02期

8 唐棣,王永成,常文保,慈云祥,郭振泉;时间分辨荧光免疫分析法直接测定雌二醇[J];分析化学;1999年08期

9 熊冬生,刘嘉,邵晓枫,李蓉,许元富,彭晖,范冬梅,朱祯平,杨纯正;人VEGF受体II基因3区的克隆、表达研究[J];高技术通讯;2002年05期

10 张宏伟,刘伟,王吉吉;动物产品中兽药残留的原因及控制对策[J];中国畜牧兽医;2004年07期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 余蕾;李菊升;余文祥;李崇珍;李学忠;;抗人间日疟原虫子孢子单克隆抗体的研制及初步鉴定[J];中国病原生物学杂志;1993年03期

2 李超;林祥梅;余多慰;李全芬;李桂芬;韩雪清;;牛干扰素单克隆抗体的制备与初步鉴定[J];动物医学进展;2010年04期

3 张春燕;李方和;龚劲松;陈妍;李时君;黄永国;张波;;抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定[J];华中科技大学学报(医学版);2008年02期

4 赵春城;刘一军;徐帮兴;杨婷婷;吴杰;沈雯琰;张凌裳;孙秀兰;赵晓联;;抗无色孔雀石绿抗体的制备及鉴定[J];中国卫生检验杂志;2009年01期

5 丁建祖;楼涤;严晓岚;卓敏敏;曾肖們;;氯胺酮单克隆抗体的研制及其免疫学特性研究[J];中国药物滥用防治杂志;2009年03期

6 孙慧慧;王旭;王惠国;谭建华;朴敬爱;朴君;马彪;刘庆平;李文哲;;C-myc单克隆抗体的制备及鉴定[J];免疫学杂志;2011年08期

7 郝琴;曹伯良;侯学霞;耿震;万康林;;中国莱姆病螺旋体特异性单克隆抗体的制备及初步鉴定[J];中国人兽共患病学报;2008年05期

8 刘军桂;周宁新;张效东;;抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定[J];科学技术与工程;2009年10期

9 汤欣,袁佳琴,马湮笕直,葛谷博磁;晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究──第二部分　晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备[J];眼科研究;1996年02期

10 林月霞;董斌;袁茵;段涛;田素娟;;抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选[J];广东药学院学报;2009年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈任安;刘利;梁英民;;抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

2 马文静;刘成成;张浩;;Bla g7单克隆抗体的制备与鉴定[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年

3 尹锐;郝飞;钟白玉;李芹阶;李安信;;特异性HPV16E7 CTL表位肽-MHC Ⅰ复合物单抗的制备及鉴定[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年

4 廖志雄;沈建根;来晓瑜;黄河;;抗间充质干细胞单克隆抗体的制备及其生物学特性研究[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

5 赵邑;赵峰梅;齐延红;潘薇薇;何永吉;张全爱;;人源化抗组织因子TF抗体的构建和表达[A];2008年全国生物化学与分子生物学学术大会论文摘要[C];2008年

6 王法财;沈玉先;;抗人MANF单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[A];中国药理学会第十次全国学术会议专刊[C];2009年

7 尹文;杨敬;薛小平;雷迎峰;吕欣;韦三华;胡兴斌;孙梦宁;徐志凯;;HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年

8 李娅杰;张奉春;;特异性抗SSA/Ro单链可变区噬菌体抗体的筛选、鉴定及其基因序列分析[A];中华医学会全国风湿病学年会论文汇编[C];2003年

9 来晓瑜;黄黎;曹军丽;樊建玲;郑晶;曾芬芳;黄河;;单克隆抗体ZUC3免疫磁珠分选入骨髓间充质干细胞的研究[A];2007年浙江省器官移植学术会议论文汇编[C];2007年

10 杨肃文;张钧;周美霞;乐志安;谢鑫友;;尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定[A];2008年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2008年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年

2 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年

3 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年

4 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年

5 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年

6 段晓宏 吴一福;四军医大获得13种新的CD编号[N];中国医药报;2005年

7 记者 项铮;单抗可能成为靶向性强的肿瘤药物[N];科技日报;2005年

8 大洋;白细胞制成抗体有望防治禽流感[N];中国消费者报;2008年

9 江苏省人民医院 变态反应研究所所长 何韶衡邋周宁人 整理;让蟑螂的致敏瀑布断流[N];健康报;2008年

10 马里;我国首例人治疗性抗体转基因奶牛诞生[N];大众科技报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 张辉;单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性及胶体金试纸研制[D];吉林大学;2008年

2 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年

3 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年

4 徐海燕;人BAFF基因转染细胞及其单克隆抗体的生物学特性[D];苏州大学;2005年

5 郭莉;一个新的白细胞膜抗原ZCH-2B8a编码基因及其生物学特性的研究[D];浙江大学;2006年

6 秦迎松;人促血液血管细胞生成素（Haemangiopoietin, HAPO）单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年

7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年

8 曹s

本文编号：737563