弓形虫肌动蛋白表达及其抗血清制备

发布时间：2017-08-30 23:22

  本文关键词：弓形虫肌动蛋白表达及其抗血清制备

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【摘要】：目的体外制备弓形虫肌动蛋白(actin)及其多克隆抗体。方法以弓形虫cDNA链为模板,PCR扩增actin基因,亚克隆至pET30a载体,转化到大肠埃希菌BL21中;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达actin-His6蛋白;用纯化的蛋白加免疫佐剂免疫SD大鼠,收集抗血清,制备多克隆抗体,抗体亲和纯化柱纯化并分析抗体的效价。结果 actin基因的PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,在1 000 bp附近有一条带,与目的基因(actin cDNA长度为1 131 bp)大小相符;actin/pET30a重组质粒经BamHI和XhoI双酶切,1.0%琼脂糖凝胶电泳分析酶切产物,在1 000和5 000 bp附近可见条带;actin-His6蛋白在3～4 h时表达量达到峰值;蛋白可溶性分析显示,actin-His6蛋白主要以包涵体的形式存在;获得了抗actin-His6蛋白的大鼠源性抗血清。结论弓形虫actin蛋白在原核系统中得到了表达,用该蛋白免疫动物后获得了抗血清。
【作者单位】： 新乡医学院药理学教研室;新乡医学院寄生虫学教研室;
【关键词】： 弓形虫 肌动蛋白 蛋白表达 多克隆抗体
【基金】：河南省科技攻关计划项目(112102310209) 新乡医学院博士科研启动基金(100777)
【分类号】：R392
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii)是一种专性细胞内寄生原虫,可感染几乎所有的有核细胞,由其引发的弓形虫病(toxoplasmosis)在全世界范围内广泛流行,给人类健康和畜牧业发展造成了较大的损失[1]。到目前为止弓形虫入侵宿主细胞的分子机制尚未完全阐明,有研究结果表明,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 尹志奎;邓智建;郑斌;;刚地弓形虫醛缩酶蛋白的表达及其多克隆抗体的纯化[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年10期

2 戴佳琳;黄江;廖兴江;李波;王宇;江楠;;亚洲带绦虫EIFs3克隆与免疫反应性分析[J];中国公共卫生;2010年09期

3 刘玉江;戴佳琳;黄江;王宇;;猪带绦虫成虫EF-1基因生物信息分析及原核表达[J];中国公共卫生;2011年01期

4 郑斌;何蔼;李卓雅;郑小英;张瑞琳;杨潇;詹希美;;弓形虫MIC 6羧基端蛋白片段的表达及其多克隆抗体的制备[J];中国人兽共患病学报;2009年09期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 朱壮春;陈阳;郝东升;马玉妹;王艳茹;曹向可;穆艮艮;李金坤;史相国;;牙鲆腹水病病原免疫血清的制备和纯化试验研究[J];水产科学;2010年06期

2 王玲珑,张春燕,屠丽萍,俞月芳,蔡傲;不同温育条件在IRMA检测肿瘤标志物中的对比分析[J];放射免疫学杂志;2005年02期

3 赵东;常江;;中药有效成分免疫增强作用机制的研究概况[J];包头医学院学报;2013年04期

4 王玉新;张文霞;;化学发光法检测人绒毛膜促性腺激素的影响因素[J];河北医药;2012年08期

5 李建龙;;GICA与EIA法检测血清HBsAg结果比较[J];疾病监测与控制;2009年05期

6 梁淑兰;邓伟航;;1例患者两种乙肝两对半检测结果分析[J];检验医学与临床;2010年22期

7 陆霓虹;杨蕤;邓常文;汪亚玲;;HIV/AIDS合并肺结核与单纯肺结核患者临床特征分析[J];昆明医学院学报;2012年02期

8 柳云霞;宋继武;牟月照;;可摘局部义齿修复后龈沟液中白介素-1变化的实验研究[J];临床口腔医学杂志;2010年11期

9 乔秀真;;急性髓系白血病应用重组人白介素-2联合乌苯美司维持治疗的临床研究[J];河北医药;2013年24期

10 王君龙;张昕炜;苗岩;王立杰;金玮;;血清Fβ-HCG、总βHCG等指标联合检测对异位妊娠早期诊断的实验分析[J];求医问药(下半月);2011年02期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 毛俐;联吡啶钌结合纳米材料构建信号增强型及多组分检测型电致化学发光免疫传感器研究[D];西南大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前8条

1 向跃芸;尿液微量清蛋白检测方法的建立与评价[D];中南大学;2011年

2 韩金钢;鳗鲡致病菌快速诊断试剂盒的研制及流行规律调查[D];集美大学;2011年

3 吴汶秀;医院检验信息系统（LIS）的设计与实现[D];电子科技大学;2011年

4 文正伟;抗人共刺激分子B7-2单克隆抗体的免疫放射分析试剂盒的研制及应用研究[D];苏州大学;2007年

5 翟士军;可溶性CD80分子免疫放射分析方法的建立及应用研究[D];苏州大学;2009年

6 孔春林;柔嫩艾美耳球虫真核翻译起始因子3d（eIF3d）基因的研究[D];上海师范大学;2012年

7 唐晓倩;玉米赤霉烯酮单克隆抗体研制[D];湖北大学;2012年

8 吴雪莉;胃液隐血智能检测胶囊的初步研究[D];重庆大学;2013年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王健,赵嘉庆,王娅娜,丁淑琴,赵巍;细粒棘球蚴延伸因子-1基因的克隆、测序及特性分析[J];宁夏医学杂志;2005年08期

2 包怀恩;我国亚洲牛带绦虫研究的现状和展望[J];热带医学杂志;2002年03期

3 黄江;胡旭初;包怀恩;余新炳;李丽;郎书源;廖兴江;;亚洲带绦虫成虫全长cDNA质粒文库的构建及EST测序[J];热带医学杂志;2007年02期

4 庞建新;黄江;胡旭初;徐劲;余新炳;包怀恩;郎书源;;亚洲带绦虫成虫延伸因子-1基因的克隆和分析[J];热带医学杂志;2007年06期

5 沈杰;李慧华;张建亭;刘利辉;谭渊明;周宏灏;刘昭前;;eIF3S10在肺癌组织中的表达及与化疗反应的关系[J];国际病理科学与临床杂志;2006年05期

6 廖兴江;戴佳琳;黄江;胡旭初;余新炳;申萍香;周灵贵;郎书源;;亚洲牛带绦虫泛素缀合酶E2的克隆表达及免疫鉴定[J];西安交通大学学报(医学版);2009年04期

7 戴鹏;戴佳琳;黄江;廖兴江;郎书源;周灵贵;申萍香;;亚洲牛带绦虫TaCRISP基因克隆、表达和序列分析[J];中国公共卫生;2009年04期

8 戴佳琳;黄江;廖兴江;周灵贵;申萍香;刘玉江;郎书源;;猪带绦虫腺苷酸激酶基因及蛋白结构特性分析[J];中国公共卫生;2009年10期

9 郑斌,何蔼,易冰,李卓雅,郑焕钦,张瑞琳,詹希美;弓形虫不同地理株致密颗粒蛋白基因的比较研究[J];中国人兽共患病杂志;2004年09期

10 黄江;胡旭初;徐劲;余新炳;包怀恩;郎书源;廖兴江;;猪带绦虫成虫cDNA质粒文库的构建及EST测序[J];中国人兽共患病学报;2008年12期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 董强,高兴政;弓形虫动物转种条件的研究[J];中国寄生虫病防治杂志;2000年01期

2 邹路,关淑春,邹宝生;儿童弓形虫性腹痛[J];中国人兽共患病杂志;2001年05期

3 黄星,张光明,赵华竹;1990～2000年新疆弓形虫病研究回顾[J];地方病通报;2001年04期

4 李慧珠;弓形虫与弓形虫病[J];生物学通报;2002年05期

5 周立,张立新,唐建民;大庆市人群感染弓形虫情况的调查[J];实用临床医学;2002年05期

6 王月芹,刘晓田,任丽娜,杨方;牡丹江市264例献血源弓形虫调查[J];牡丹江医学院学报;2002年01期

7 庞启贞;浅谈弓形虫对妊娠的危害和防治对策[J];中国热带医学;2002年02期

8 魏梅雄,张述义;上海市人体弓形虫病研究概况[J];医学综述;2002年06期

9 万红娇,曹冬凤,宋贤响;中医药防治弓形虫病现状[J];山东中医杂志;2004年10期

10 陈望阳;搂抱猫狗当心患弓形虫病[J];农村新技术;2005年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱引洁;吴文学;贺国强;;弓形虫病的诊断现状[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

2 李辉;张健;;一例犬弓形虫病的诊断与治疗[A];中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形虫病的流行的新趋势[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

4 崔平;秦建华;方素芳;;河北省动物弓形虫病流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

5 蔺智兵;张厚双;曹杰;周勇志;李国清;周金林;;弓形虫real-time PCR检测方法的建立和初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

6 杨娜;穆名杨;李红魁;何建斌;;中国东北地区鸡源弓形虫的流行病学调查[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2012年

7 刘晶;蔡进忠;于晋海;夏兆飞;林德贵;刘群;;几种动物弓形虫病血清流行病学的初步调查[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年

8 王权;蒋蔚;荆振宇;陈永军;杨康;宋宁宁;崔常勇;;五种中药体外抗弓形虫抑制效果的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年

9 巩薇;卫礼;王吉;贺争鸣;邢瑞昌;;实验小鼠弓形虫检测方法的建立及应用[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年

10 陈西岐;刘秀兰;张克功;于德顺;;猫弓形虫病的诊治[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 林晓丽;养猫者易感染弓形虫应谨防患精神分裂症[N];中国中医药报;2007年

2 小郭;弓形虫病危害不轻[N];中国商报;2000年

3 戴培红;北京友谊医院探索治疗弓形虫病的新途径[N];中国医药报;2000年

4 本报记者 蔡玉冰 通讯员 黄贤君;弓形虫没你想的可怕[N];广东科技报;2012年

5 李水源;当前猪场弓形虫病的防控[N];中国畜牧兽医报;2013年

6 本报记者 白轶南;弓形虫病 危及胎儿健康[N];保健时报;2005年

7 临城县畜牧局 李路民;猪得弓形虫病 吃了猫的亏[N];河北科技报;2002年

8 北京友谊医院北京热带医学研究所研究员 甘绍伯 副主任医师 冯曼玲;弓形虫——宠物的“宠物”[N];健康报;2000年

9 连孝华;孕妇玩猫狗易危害胎儿[N];卫生与生活报;2007年

10 王志海 邵芹;犬弓形虫病[N];中国畜牧报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 吴亮;弓形虫“迟发型死亡”机制的研究[D];江苏大学;2012年

2 张东林;弓形虫病分子诊断方法及弓形虫分离株耐药性的研究[D];华中农业大学;2008年

3 司进;弓形虫病免疫诊断及靶向生物治疗的研究[D];南京医科大学;2005年

4 周永华;弓形虫慢性感染大鼠模型的建立及其在学习记忆能力影响研究中的应用[D];南京农业大学;2010年

5 刘世国;精液传播弓形虫的实验研究[D];华中科技大学;2006年

6 贾博寅;感染弓形虫宿主的转录组及标识性microRNAs的研究[D];吉林大学;2014年

7 余莉;利用RNA干扰技术双通道抑制弓形虫嘌呤补救合成途径[D];安徽医科大学;2008年

8 肖月;应用三种抗原的弓形虫流行病学比较研究[D];吉林大学;2011年

9 马亮;弓形虫表面抗原SAG3单克隆抗体的制备及应用研究[D];吉林大学;2012年

10 王洪法;弓形虫ROP2基因在大肠杆菌和卡介苗中的表达及免疫原性的研究[D];吉林大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曾艳波;急性弓形虫小鼠感染模型的建立与抗动物弓形虫病药物的初步筛选[D];中国农业科学院;2011年

2 崔平;河北省动物弓形虫病流行病学调查[D];河北农业大学;2003年

3 曹丽艳;弓形虫GJS株表面抗原1基因的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2009年

4 陈杰;上海市宠物犬、猫的弓形虫病流行病学研[D];上海交通大学;2010年

5 叶强;弓形虫排泄分泌抗原的功能组分分析与鉴定[D];中国农业科学院;2013年

6 孟鹏;半套式PCR技术检测土壤中弓形虫的研究[D];甘肃农业大学;2013年

7 蒲元华;鸡感染弓形虫的临床症状和病理变化观察及在组织中分布[D];中国农业科学院;2014年

8 王娜;新型抗原传递载体在抗弓形虫病疫苗上的初步应用[D];延边大学;2011年

9 王花;安徽省市售猪肉弓形虫感染阳性率及基因分型的研究[D];安徽医科大学;2012年

10 杨振;我国部分地区水生动物弓形虫感染情况调查[D];南京农业大学;2010年

，

本文编号：762085