复制子荧光素酶表达质粒pSVK-luc的构建与应用

发布时间：2017-08-31 00:25

  本文关键词：复制子荧光素酶表达质粒pSVK-luc的构建与应用

  更多相关文章： 荧光素酶基因 复制子载体 体内外表达 活体成像

【摘要】：目的为研究复制子DNA疫苗在生物活体内的表达情况,构建含有荧光素酶报告基因的复制子表达质粒pSVK-luc。方法 PCR扩增荧光素酶报告基因,克隆入DNA复制子载体pSVK,酶切鉴定和测序分析筛选阳性重组质粒pSVK-luc;化学法转染人胚肾293T细胞,流式细胞术和免疫荧光法检测荧光素酶基因在293T细胞中的表达;利用基因电穿孔导入仪递送重组质粒至BALB/c小鼠股四头肌,活体成像仪动态观测荧光素酶基因在小鼠体内的表达。结果 pSVK-luc经相应酶切和测序鉴定,与预期设计完全一致。流式细胞术和免疫荧光检测均可见荧光素酶基因表达;同时活体成像仪也能检测到该基因在小鼠体内的表达。结论 pSVK-luc表达质粒的构建成功将为复制子DNA疫苗体内作用机制研究和体内电穿孔递送条件的优化奠定实验基础。
【作者单位】： 新疆大学生命科学与技术学院;军事医学科学院基础医学研究所;
【关键词】： 荧光素酶基因 复制子载体 体内外表达 活体成像
【基金】：国家自然科学基金(31100655)
【分类号】：R392-33
【正文快照】： )DNA疫苗由于兼具预防和治疗双重功效,特别是能够诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic tlymphocyte,CTL)活性,被认为是一种具有良好应用前景的免疫治疗方法,对研究治疗重大慢性疾病的新型治疗性疫苗极为有利[1-2]。然而近期研究表明DNA疫苗在大动物模型和人体试验中治疗

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张亮;李潇潇;韩刚;董金凯;阎瑾琦;肖毅;于继云;;不同方式递送质粒DNA诱导体内表达效果的实验研究[J];军医进修学院学报;2010年01期

2 余云舟;孙志伟;刘志刚;俞炜源;;基于DNA的Semliki森林病毒复制子载体体内外高水平表达外源基因[J];生物化学与生物物理进展;2006年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张亮;阎瑾琦;王越;肖毅;高昆;董金凯;王博;于继云;;可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的构建及体内外表达[J];南方医科大学学报;2011年06期

2 余云舟;孙志伟;俞炜源;;炭疽保护性抗原第四结构域基因在重组SFV复制子载体中的表达[J];军事医学科学院院刊;2006年06期

3 刘国栋;刘荷中;于继云;郭炳冉;;复制型DNA疫苗的研究进展[J];军事医学科学院院刊;2006年06期

4 任晓慧;罗胡英;刘松财;张明军;欧阳松应;张永亮;;普通质粒载体与Semliki森林病毒复制子载体表达GHRH的比较[J];农业生物技术学报;2008年02期

5 李珂;赵光;高春芳;何伟华;;小动物活体成像技术的应用进展[J];实用医药杂志;2012年01期

6 余云舟;孙志伟;王双;俞炜源;;A型肉毒毒素受体结合区Hc在重组SFV复制子载体中的表达[J];生物工程学报;2008年01期

7 李传宝;华甜;金海明;杜宏武;;电激和普鲁卡因增强DNA导入哺乳动物活体效率[J];生物技术;2011年06期

8 马尧;李娜;余云舟;孙志伟;俞炜源;;重组PA4复制子病毒颗粒疫苗免疫原性的分析[J];生物技术通讯;2012年01期

9 付延军;金宁一;金洪涛;李臻;辛苏文;李萍;韩贞珍;李太元;;DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达[J];中国生物制品学杂志;2007年04期

10 余松涛;杨应斌;史春梦;陈陵;汤旭东;黎川;师红磊;李长珠;李宁;王国珍;吴玉云;房殿春;杨仕明;;端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究[J];实用临床医药杂志;2010年05期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 王晓敏;闫明霞;梁琳慧;李金枝;朱淼鑫;孔韩卫;赵方瑜;吴一迁;姚明;;GFP和Luc双标技术在小鼠肿瘤模型建立中的应用[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 王珏;具有“人源性微环境”的乳腺癌原位和转移小鼠模型的建立和研究[D];南京医科大学;2010年

2 颜汝平;负载肿瘤抗原的DC疫苗体内外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究[D];昆明医学院;2011年

3 夏添松;人源性乳腺癌骨转移小鼠模型的建立和应用[D];南京医科大学;2011年

4 张亮;新型可复制型抗肿瘤DNA疫苗PSCK-2PFcGB的抑瘤活性及免疫学机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

5 任晓慧;RNA复制子对基因表达的促进作用及动物促生长方法的探讨[D];吉林大学;2007年

6 侯贺礼;PI3K抑制剂和辐射对细胞命运的影响研究[D];中国科学技术大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 余云舟,孙志伟,俞炜源;基于DNA和RNA的双功能Semliki森林病毒复制子载体的构建[J];生物工程学报;2005年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 梁雪松;连建奇;周永兴;聂青和;郝春秋;;IRES特异性IRNA对HCV IRES启动蛋白翻译细胞内抑制作用[J];世界华人消化杂志;2003年02期

2 黄莺;邵炜;贾丽丽;俞炜源;俞永新;;日本脑炎病毒(JEV)复制子表达载体的构建及其鉴定[J];病毒学报;2007年01期

3 杨滔;赵俊琴;刘水平;李洪涛;李建华;;结构域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR调控荧光素酶基因的表达[J];现代生物医学进展;2007年05期

4 唐丽;朱武洋;付士红;何英;王志玉;梁国栋;;nsP2-726Pro定点诱变对辛德毕斯病毒XJ-160复制子载体特性的影响[J];病毒学报;2010年02期

5 黄莺;刘珊;杨鹏;王超;杜韫;孙志伟;俞炜源;;日本脑炎病毒C蛋白对其复制子载体自主复制活性的影响[J];生物工程学报;2010年08期

6 连海;;辛德毕斯病毒载体的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2010年12期

7 伏爽,程康,王申五,马大龙,王德炳;Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达[J];北京医科大学学报;1998年06期

8 魏红山;刘志英;刘顺爱;董庆鸣;郭晶晶;张四平;蒋为;成军;;应用干扰RNA技术抑制乙型肝炎病毒抗原的体外表达[J];中华传染病杂志;2007年03期

9 徐松琳;金拓;;新型聚乙烯亚胺衍生物体内转染活性的研究[J];现代生物医学进展;2008年12期

10 张海燕;李艳;王U，

本文编号：762381