H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗的构建及鉴定

发布时间：2017-08-31 17:50

  本文关键词：H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗的构建及鉴定

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【摘要】：目的研制一种制备工艺简单、无需鸡胚即可大量生产的预防季节性H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗。方法构建含有外源H3HA基因的重组腺病毒穿梭载体质粒pacAd5-H3HA,并用酶切的方法进行鉴定;将鉴定阳性的pacAd5-H3HA与腺病毒骨架载体质粒线性化后用脂质体介导共转染HEK293细胞,分别采用RT-PCR、间接免疫荧光试验以及Western blot方法对构建的H3亚型流感重组腺病毒疫苗进行鉴定。结果 RT-PCR扩增出约1.8kb片段,与目的片段大小相同,表明外源基因H3HA成功插入重组腺病毒。间接免疫荧光试验显示重组腺病毒转染后的HEK293细胞中检测到特异性蛋白,Western blot显示在70ku处有一反应条带,表明该H3HA蛋白能被兔抗H3亚型HA蛋白血清识别。结论构建的H3亚型流感重组腺病毒能在HEK293细胞中表达具有反应原性的H3HA蛋白,为后续的动物实验奠定了基础。
【作者单位】： 吉林农业大学动物科技学院;军事医学科学院军事兽医研究所;吉林大学畜牧兽医学院;
【关键词】： H亚型流感病毒 重组腺病毒疫苗 HEK细胞
【基金】：国家高技术研究发展计划项目(No.2012AA02A403) 重点基础研究发展计划项目(No.2012CB722501) 全军医学科技“十二五”科研项目(No.BWS11J048)
【分类号】：R392
【正文快照】： 流行性感冒是由流感病毒引起的能够在人群中广泛传播的急性呼吸道传染病,根据症状不同可分为季节性流感和大流感。其中以H3亚型流感病毒为主引起的季节性流感每年均有发生,严重时可导致死亡,且死亡病例多数(90%)为老年人,以及有潜在慢性病的健康人群[1,2]。腺病毒作为重组疫

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1 吕茂民,贾莉玮,王建国,杨姝,熊景峰,章金刚;G418抗性HEK293细胞的培育[J];中国实验动物学报;2003年01期

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本文编号：767043