高密度脂蛋白作为调理素促进单核细胞对A群链球菌的吞噬

发布时间：2017-08-31 21:06

  本文关键词：高密度脂蛋白作为调理素促进单核细胞对A群链球菌的吞噬

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【摘要】：高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)的基本功能是作为反向运载工具,将胆固醇从肝外组织运送回肝脏进行代谢,在清除胆固醇的过程中发挥了重要作用。但许多研究证实HDL具有抗感染的作用。近来,我们证明了HDL可以与M41型A群链球菌(group A Streptococcus, GAS)表面的Ⅰ型胶原样蛋白(streptococcal collagen-like protein 1,Sell)特异性结合,但其相互作用的病理或生理意义并不清楚。另外有研究证明一些清道夫受体可以介导单核细胞吞噬HDL。因此,我们提出了HDL可能作为调理素介导单核细胞对M41型GAS的吞噬的假说。本研究利用荧光标记和平板菌落计数等手段对这一假说进行了验证。实验结果表明,HDL能够显著促进U937单核细胞对GAS的吞噬效率,比对照提高了20%-30%,但小于低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)介导的调理吞噬效率(55.2%)。GAS与U937单核细胞共孵育60min后,被单核细胞吞噬的GAS均被杀死。尽管,极低密度脂蛋白(very-low-density lipoprotein, VLDL)也能够与M41型GAS(ATCC 12373)特异性结合,但VLDL不能够提高U937单核细胞对GAS的吞噬效率。由于M41型GAS(CMCC 32198)不能与HDL、LDL和VLDL特异性结合,因此HDL、LDL、VLDL并不能促进U937单核细胞对该菌的吞噬。进一步研究发现,生理浓度的HDL (1000μg/ml)同样具有类似的调理作用。用CD36单抗处理U937单核细胞后,HDL基本失去了介导调理吞噬作用的能力,而CD4单抗对此调理吞噬作用无影响,因此,单核细胞表面参与调理吞噬作用的受体是CD36。另外,重组表达的M41型GAS的Ⅰ型胶原样蛋白(recombinant streptococcal collagen-like protein 1,rScll)可以竞争性的抑制GAS与HDL的结合,几乎完全抑制了这种调理吞噬作用。因此,本研究证明了HDL可以作为调理素促进U937单核细胞对GAS的吞噬效率,也证明了单核细胞表面的CD36是调理素受体。
【关键词】：高密度脂蛋白 A群链球菌 调理素 单核细胞 吞噬作用
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R378.12
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 缩略词表9-11
• 1 引言11-16
• 1.1 A群链球菌11-13
• 1.1.1 A群链球菌及其致病性11-12
• 1.1.2 A群链球菌胶原样蛋白12-13
• 1.2 高密度脂蛋白及其功能13-16
• 1.2.1 血浆脂蛋白13-14
• 1.2.2 高密度脂蛋白及其功能14-15
• 1.2.3 清道夫受体CD3615-16
• 1.3 立题依据16
• 1.4 研究内容16
• 2 实验材料16-20
• 2.1 主要仪器设备16-17
• 2.2 主要试剂17-20
• 2.2.1 化学试剂17
• 2.2.2 抗原抗体17-18
• 2.2.3 菌株和细胞18
• 2.2.4 培养基的配制18-19
• 2.2.5 化学贮存液的配制19-20
• 3. 实验方法20-29
• 3.1 A群链球菌ATCC 12373-M41 type GAS和CMCC 32198-M41 type GAS的培养及标记20-21
• 3.1.1 GAS的培养20-21
• 3.1.2 GAS的标记21
• 3.2 U937单核细胞的冻存、复苏及培养21
• 3.2.1 U937单核细胞的冻存21
• 3.2.2 U937单核细胞的复苏及培养21
• 3.3 ELISA检测两株GAS与LDL、HDL、VLDL的结合21-23
• 3.3.1 ELISA检测两株GAS与LDL的结合22
• 3.3.2 ELISA检测两株GAS与HDL的结合22-23
• 3.3.3 ELISA检测两株GAS与VLDL的结合23
• 3.4 rScl1的诱导表达及纯化23-26
• 3.4.1 工程菌的培养及诱导表达23
• 3.4.2 rScl1表达产物的SDS-PAGE检测23-25
• 3.4.3 rScl1的纯化25-26
• 3.4.4 蛋白含量的测定26
• 3.5 r Scl1内毒素的去除及蛋白质内毒素含量的测定26-27
• 3.5.1 去除rScl1的内毒素26
• 3.5.2 测定内毒素的含量26-27
• 3.6 体外吞噬实验27-29
• 3.6.1 LDL、HDL、VLDL介导的调理吞噬试验27
• 3.6.2 不同浓度HDL介导的调理吞噬效率的差异27-28
• 3.6.3 Anti CD36单克隆抗体对HDL介导的调理作用的影响28
• 3.6.4 rScl对HDL介导的U937单核细胞吞噬M41型GAS(ATCC 12373)的影响28-29
• 4 实验结果与分析29-36
• 4.1 ELISA验证LDL、HDL、VLDL与GAS的结合29
• 4.2 HDL可以作为调理素介导U937单核细胞吞噬M41型GAS(ATCC 12373)29-33
• 4.3 不同浓度HDL介导U937单核细胞对ATCC-M41型GAS吞噬效率的影响33-34
• 4.4 U937单核细胞表面参与调理吞噬作用的受体是CD3634-35
• 4.5 rScl1抑制HDL介导的U937单核细胞对ATCC-M41型GAS的吞噬35-36
• 5 讨论36-37
• 6 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 作者简介43

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