双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立

发布时间：2017-09-03 11:21

  本文关键词：双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立

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【摘要】：目的构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具。方法通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-UbiGluc)。利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性。结果筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western印迹检测到HCV NS5A蛋白表达。NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移。IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低。结论该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值。
【作者单位】： 军事医学科学院野战输血研究所;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 荧光素酶类 萤火虫 Gaussia荧光素酶 细胞模型 复制子
【基金】：北京市自然科学基金资助项目(7112104,7122136)
【分类号】：R373.21
【正文快照】： 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染率占全世界人口的1%~2%,我国的感染率达到3.2%,其中70%~80%的感染者转为慢性,其转归与肝硬化和肝细胞癌有密切关系[1,2]。丙型病毒性肝炎具有高流行性、病程隐匿性和长期感染导致预后不良等特性,因此成为一个严重的医学和社会经济学

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8 朱s，

本文编号：784697